等温増幅蛍光測定装置

Genie® II (ジニーⅡ) は、 OptiGene社(英国) が開発・製造した等温増幅蛍光測定装置です。 超高速で LAMP (Loop-mediated Isothermal Amplification）法* による等温遺伝子増幅を行うことができます。 装置は 2 つの独立したヒートブロックを有し、ブロック温度勾配設定により反応条件の最適化が可能です(外部PCで操作）。 また、リアルタイムに蛍光を検出することで増幅をモニターすることができ、増幅産物に対し会合曲線解析(Annealing curve analysis）を行うことで、その特異性を確認することができます。

*： LAMP法は、標的遺伝子に対する4種類のプライマーと鎖置換型DNA合成酵素を用いて、一定温度 （65℃付近） で反応させる遺伝子増幅法であり、高い増幅効率と特異性を特長とします。LAMP法は、栄研化学株式会社が特許を保有しております。

• 約20分間で増幅と検出が可能
• 遺伝子増幅を蛍光でリアルタイムにモニタリング可能
• 増幅産物に対し会合曲線解析を行うことが可能
• ブロック温度勾配設定が可能 （最大温度差8℃）
• 操作性の高いタッチスクリーン
• ヒーター部はカバーの開閉により安全性を確保

サンプル数	16穴 (8穴ブロック×2)
サンプルの容量	20µl ～ 150µl 専用の 8連反応チューブを使用
タッチスクリーン	高輝度 TFT / カラー 液晶モジュール、バックライト 付
ヒーター技術	セラミック基板
冷却方法	強制対流
温度センサー	高精度サーミスター搭載
温度制御タイプ	マルチゾーン独立デジタルPID制御
温度制御範囲	室温から110℃まで制御可能
温度精度	± 0.1℃
ブロック全体の温度分布	± 0.2℃
温度勾配	プログラムで最大8℃ まで可能（外部PCで操作）
光学系ソ－ス	470nm LED 及び高精度干渉フィルター
検出フィルター	510nm ロングパスフォトダイオード及び高精度干渉フィルター
動作温度	10℃ ～ 40℃
消費電力（最大）	150W
寸法	(H)20cm × (D)21cm X (W)30cm
重量	2 kg
ポート	1 デバイスポート
バッテリー	充電式 Li-Po バッテリー
本体同梱品	USBメモリ（Genie® II Software, マニュアル）、電源ケーブル、 外部PC接続用ケーブル、電源アダプター

QProbeを用いたSNPsタイピング (LAMP法)

反応条件

標的	ヒト ALDH2 遺伝子
鋳型 DNA	・ 標的に特異的な DNA 断片（0.2ng / 反応 ; NN型、NM型、MM型） ・ 毛髪から調製した DNA サンプルA（NN型）、サンプルB（NM型）
プローブ DNA	QProbe-3G （1µM/反応； 日鉄環境エンジニアリング株式会社）
反応溶液組成 （25.0µl）	・ LAMP 法反応溶液 (Buffer、Bst DNA Polymerase を含む) ・ Primers ・ QProbe ・ DNAサンプル

 

会合曲線解析（Annealing curve analysis）

4 つの異なる濃度の鋳型 RNA の 2 つの標的領域に対し、プライマーセット、Reverse Transcriptase (AMV) 、Isothermal Master Mix を用いて増幅し、その増幅産物に対し会合曲線解析 （Annealing curve analysis） を行った。

増幅産物の二本鎖DNAを熱変性して再会合する温度を測定し、反応の特異性を確認した。（会合曲線の微分プロット）

 

温度勾配機能

検討しているプライマーセットに関し、反応温度の最適化を行うため、59.0℃ から67.0℃ までの温度勾配を設定し増幅を行った。増幅効率の良い反応温度は、63℃ であることが分かった。

 

　Genie^® II、Isothermal Master Mix、Tube Strip、LAMPプライマー設計&合成サービス