Deletion Kit

　Deletion Kitは、あるDNA断片をその末端から目的に応じた長さに分解し、ベクターに連結するまでの一連の操作を円滑に行えるように構成されたキットである。ディレーションミュータント作製などに最適である。

① Exonuclease III (50units/µl, 20µl)	―
② 1×Exonuclease III Buffer(1ml)	50mmol/1 Tris-HCl(pH8.0)、5mmol/l MgCl2、1mmol/l DTT
③ 5mol/l NaCl(100µl)	―
④ Mung Bean Nuclease(25units/µl、10µl)	―
⑤ 2×Mung Bean Nuclease Buffer(1ml)	20mmol/l CH3COONa(pH5.0)、0.2mmol/l (CH3COO)2Zn、200mmol/l NaCl、10% Glycerol
⑥ Klenow Fragment(5units/µl、10µl)	―
⑦ 1×Klenow Fragment Buffer(500µl)	10mmol/l Tris-HCl(pH8.0)、5mmol/l MgCl2、0.1mmol/l dNTPs
⑧ T4 DNA Ligase(500units/µl、10µl)	―
⑨ 1×T4 DNA Ligase Buffer(500µl)	50mmol/l Tris-HCl(pH7.9)、10mmol/l MgCl2、20mmol/l DTT、1mmol/l ATP

一般的なDeletion反応例

Exonuclease IIIによって二本鎖DNAを目的の長さまで分解する。
↓
Mung Bean Nucleaseによって一本鎖DNA部分を分解する。
↓
Klenow Fragment＊)によって二本鎖DNAを完全に平滑末端化する。
↓
完全に平滑末端化された二本鎖DNAをLigaseによってベクター上の適当な平滑末端切断部位に連結する。
＊)Mung Bean Nucleaseによる平滑末端化をより完全なものにするためKlenow Fragme[tを用いる

1) Kowalski, D., Kroeker, W. D. and Laskowski, M. Sr. : J. Biochemistry, 15, 4457(1976)
2) MucCtchan, T. F., Hansen, J. L., Dame, J. B. and Mullins, J. A. : Science, 225, 626(1984)

Deletion Kit マニュアル（第2版）