Deoxyribonudease Iは、一本鎖DNAおよび二本鎖DNAを分解し、5'りん酸基を含むモノヌクレオチドあるいはオリゴヌクレオチドを生じる反応を触媒する酵素です。
　本品は、RT-PCR用RNAを調製するための専用DNaseであり、下記の純度検定においてRNase活性が検出されないことを確認しています。本品はDNaseの失活に熱処理を採用しており、従来品よりも簡単なプロトコルでRT-PCR用RNAを調製できます。

利用法 :	RT-PCR用精製RNAの作製
起源 :	Bovine Pancreas
活性 :	1unit/µl
単位の定義 :	1unitは、反応混合液 50µｌ 中で 1µg の DNA を37°C、10分間の反応で完全に分解する酵素活性とする。
酵素反応条件 :	40mmol/l Tris-HCl(pH7.9), 2mmol/l MgCl2, 0.3mmol/l CaCl2
純度 :	本酵素を 5unitsと、15µgの基質 RNA を 100µlの反応溶液中で、37°Cで1時間反応させても変性アガロースゲル電気泳動のパターンに変化は認められない。

・Deoxyribonuclease (RT Grade)×1本	[ 10mmol/l HEPES(pH7.5), 10mmol/l CaCl2, 10mmol/l MgCl2, 50% Glycerol, 0.2mg/ml BSA ]
・10×DNase (RT Grade) Buffer II×1本	[ 400mmol/l Tris-HCl(pH7.9), 3mmol/l CaCl2, 20mmol/l MgCl2 ]
・STOP Solution (RT Grade)×1本	[ 10mM EGTA(pH8.0) ]

total RNA	10µg
10×DNase (RT Grade) Buffer II	5µl
Deoxyribonuclease (RT Grade)	1µl
d.d. H2O
Total	50µl*

↓
37°C 15分間**
↓
Stop Solution 5µl添加
↓
70°C 10分間***
↓
RT-PCR****

*50µl以外の反応系で行う場合、必ずDeoxyribonuclease (RT Grade) : 10×DNase (RT Grade) Buffer II : Stop Solution=1 : 5 : 5の量比で使用して下さい。他の比率の使用ではStop Solutionの効果が十分得られない場合があります。
**15分間以上は反応させないで下さい。
***RNAは高温下では不安定です。熱処理は70°Cで行って下さい。
****逆転写反応の後には95°C 5分間の熱処理を行い、逆転写酵素の反応停止と失活を行って下さい。

　本品はRT-PCR用のRNA調製専用DNaseです。他の目的での使用はできるだけ避けて下さい。

　DNaseは上記のプロトコルでは完全には失活しませんが、RT-PCRにおいては特に問題ありません(RT-PCRの結果は、DNaseを完全に失活させた場合とほとんど変わりありません)。DNaseの完全な失活と除去を行う場合は、37°C 15分間のインキュベート後、フェノール/クロロホルム処理とエタノール沈殿による回収を行って下さい(この場合、Stop Solutionの添加および70°C 10分間のインキュベートは必要ありません)。

　DNase処理したRNAを電気泳動する場合も、フェノール/クロロホルム処理とエタノール沈殿による回収を行って下さい。反応バッファーやStop Solutionの影響により、移動度に異常をきたすことを確認しています。

MSDSのページへ

Code No.	製品名	包装単位	希望納入価格	備考
315-06421	ISOGEN PB Kit	20回用	22,000円	パラフィン包埋組織切片からのRNA抽出Kit