T4 gene 32 protein

T4 gene 32 proteinはバクテリオファージT4のDNAに必須な核酸結合タンパク質で、ヘリックス構造を不安定化する働きがあります。DNAポリメラーゼによるDNA合成の促進、site-specific mutagenesis、シークエンスの際のエキストラバンド消失^(文献5、あるいは電子顕微鏡による一本鎖DNAのマーキング等に使用され、最近では特にPCRにおける阻害物質による影響を緩和させる働きに注目されています。

起源：	Escherichia coli BB infected with T4(33- 55- 61-)phage
濃度：	3〜8mg/ml
形状：	20 mmol/l Tris-HCl(pH8.1), 100 mmol/l NaCl, 1mmol/l EDTA, 1mM DTT, 50% Glycerol
保存条件：	-20°C
純度：	1µgのλDNAと50µgのT4 gene 32 proteinを37度で1時間反応させても、λDNAの電気泳動パターンに変化は認められない。

<T4 gene 32 proteinを用いたヘミンによるPCR阻害の緩和>

0.1ngの鋳型DNA(pBR322)と一連の濃度のヘミンを含む反応溶液にて、T4 gene 32 proteinの存在下あるいは非存在下でPCRを行った。

template(pBR322) 0.1ng hemin 10〜0.001µg/µl 10×Gene Taq Universal Buffer 5µl dNTP Mixture(2.5mmol/l each) 4µl primer-forward(20pmol) 1µl primer-reverse(20pmol) 1µl Gene Taq(5units/µl) 0.5µl T4 gene 32 protein 0または2µg(最終濃度40ng/µl) ddH2O Total 50µl

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94°C 30sec. 25cycles 55°C 30sec. 72°C 1min.

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10µl 電気泳動 2% Agarose S 100V 30min. EtBr染色

1µg/µlの濃度のヘミンの存在下ではPCRが阻害されているが、40ng/µlのT4 gene 32 protein(gp32)を加えると、1µg/µlのヘミン存在下で阻害が緩和されている。

Lane 1, 12　Marker5(φX174/Hinc II digest) Lane 2　gp32 -　hemin 10µg/µl Lane 3　gp32 -　hemin 1µg/µl Lane 4　gp32 -　hemin 0.1µg/µl Lane 5　gp32 -　hemin 0.01µg/µl Lane 6　gp32 -　hemin 0.001µg/µl Lane 7　gp32 +　hemin 10µg/µl Lane 8　gp32 +　hemin 1µg/µl Lane 9　gp32 +　hemin 0.1µg/µl Lane 10　gp32 +　hemin 0.01µg/µl Lane 11　gp32 +　hemin 0.001µg/µl

＜T4 gene 32 proteinを用いたメラニンによるPCR阻害の緩和＞

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1) Kreader, C. A.: Appl. Environ.Microbiol.,62(3),1102(1996)
2) Bittner, M.,. Burke, R. L. and Alberts, B.M.: J. Biol. Chem., 254(19), 9565(1979)
3) Schwarz, K., Hansen-Hagge, T. and Bartram, C.: Nucleic Acids Res., 18(4), 1079(1990)
4) Panaccio, M. and Lew, A.: Nucleic Acids Res., 19(5), 1151(1991)
5) Kaspar, P., Zadrazil, S.and Fabry, M.: Nucleic Acids Res., 17(9), 3616(1989)
6) Huang, H. and Keohavong, P.: DNA AND CELL BIOLOGY, 15(7), 589(1996)