Taq MutS

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Taq MutSは、DNA修復系で働く酵素で、DNAのミスマッチ塩基対を認識して結合します。Thermus aquaticus由来であるため、熱(0〜75°C)に対して安定で、高い温度でも活性を維持してDNAと結合します。Taq MutSは、1〜4塩基の欠失（挿入）やGT, CT, AGのミスマッチ塩基対に効率よく結合するので、このような変異を検出する場合に非常に有効です。この特異的な結合活性を利用してポリアクリルアミドゲルあるいは固相上で変異を検出することができます。

Taq MutS	50 µg (1µg/µl)
10×Taq MutS Buffer	1 ml

保存：-20°C

　本品は試験研究用試薬ですので、医薬品、その他の目的にはご使用になれません。また、試薬についての基本的な知識のある方以外は取り扱わないで下さい。

1. 36merの合成DNAを使用したgel shift assay

　1〜4塩基の欠失(Lane 2〜5)及び8種類のミスマッチ(Lane 6〜13)に対するTaq MutSの結合活性の違いを見るため、基質100ngに反応バッファ−とTaq MutS 1ugを加え、65°Cで30分間反応させた。反応後、電気泳動により基質特異性を確認した。

	Lane Sample Lane Sample 1 AT(control) 8 AG mismatch 2 1 塩基欠失 9 TT mismatch 3 2 塩基欠失 10 AC mismatch 4 3 塩基欠失 11 AA mismatch 5 4 塩基欠失 12 CC mismatch 6 GT mismatch 13 GG mismatch 7 CT mismatch 14 AA AT(control)
6% 未変性ポリアクリルアミドゲル SYBR ® Gold染色

2. Nitrocellulose filter binding assay

　ニトロセルロ−スフィルタ−上にTaq MutS 500ngを固定した後、ビオチンラベルした36bpの合成DNA100ngをフィルタ−上で反応させた。ビオチンに対してストレプトアビジン-アルカリホスファタ−ゼ複合体を結合させ、発光基質を用いてX線フィルムで検出した。その結果、1〜3塩基欠失及びAG, CT, GTのミスマッチに特異的に結合した。

3. PCR productsを用いた欠失部位の検出試験

　正常な配列(N:normal)に対して2塩基の欠失を生じた変異配列(M:mutant)を持つプラスミドを作製した。鋳型として、NまたはMのみを用いたものとNとMを混ぜたものを用いて各々PCRを行った。PCR終了後、変性とアニ−リングを行い、直接Taq MutS(1ug)を加えて65°Cにて30分間反応させ、電気泳動を行った。(下図参照)PCRで増幅する長さを60bp, 100bp, 200bpの3種類で行った結果、それぞれにおいて欠失部位が検出できた。

4〜10%未変性ポリアクリルアミドゲル SYBR ® Gold染色

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