Ethachinmate

共沈剤といえばEthachinmete(エタチンメイト)！
もはや遺伝子工学におけるスタンダード試薬です！　大ベストセラー製品で実績も十分！

　Ethachinmate(エタ沈メイト)は、核酸(DNA及びRNA)をエタノールまたはイソプロパノール沈殿させる際に使用するアクリルアミド系の高分子キャリアー溶液です。塩の存在下(例えば>0.1 mol/l Sodium Acetate)でEthachinmateを加えてアルコール沈殿を行うだけで、以下のような利点が得られます。

・微量核酸の回収が可能

20ng/ml以上のDNA(>100塩基対)及びRNA(>120塩基)を定量的に回収できます。

・迅速なアルコール沈殿が可能

-20°Cあるいは-80°Cのインキュベーションが不要なので、アルコール添加後直ちに遠心できます。

・酵素反応を阻害しない

回収した核酸は、水やバッファーに容易に溶けます。しかも混在するEthachinmateは酵素反応を全く阻害しません。

・沈殿を目で確認できる

Ethachinmate自身がアルコール沈殿によって沈殿を形成するので、微量な核酸の場合でも大切な試料を洗い流してしまう心配はありません。

・DNase, RNase free試験済み

Ethachinmateは以下の方法でDNase, RNase freeであることを確認しています。

• DNase試験 : 1 µgのλ/Hind IIIにEthachinmateを3 µl加え、37°Cで16時間インキュベートした後、アガロースゲル電気泳動し、そのパターンに変化のないことを確認する。
• RNase試験 : 16Sおよび23S rRNA 2 µgにEthachinmateを3 µl加え、37°Cで16時間インキュベートした後、アガロースゲル電気泳動し、そのパターンに変化のないことを確認する。

DNAまたはRNA溶液(100µl) ↓←3 mol/l Sodium Acetate (添付), 3.3 µl*1) ↓←Ethachinmate, 1 µl*2) ↓ボルテックス*3) ↓←2〜2.5倍量 エタノール ↓ボルテックス*3) ↓12K×g, 室温, 5分*4) 沈殿*5)

*1) 塩濃度は終濃度0.1 mol/l以上とする。 *2) EthachinmateはDNAまたはRNA溶液100µlあたり1µl加える。ただし、溶液量が300µl以上の場合は3µlあれば十分である。また、上記の操作を再び行う場合、Ethachinmateを追加する必要はない。(繰り返しEthachinmateを加えるとDNA溶液が粘稠になり、以後の操作に支障を来す場合もある。) *3) ボルテックスを十分行うことにより、微量DNAでも定量的に回収できる。 *4) 必ずしも冷却の必要はない。 *5) 沈殿は目で確認できる。別のバッファー等に溶解し、そのまま各種酵素の基質として使用できる。また、必要に応じて70%エタノールで洗浄する。

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Q1. DNase, RNaseのコンタミはありますか?

[A1] ありません。Ethachinmateは以下の方法でDNase, RNase freeであることを確認しています。

• DNase試験 : 1 µgのλ/Hind IIIにEthachinmateを3 µl加え、37°Cで16時間インキュベートした後、アガロースゲル電気泳動し、そのパターンに変化のないことを確認する。
• RNase試験 : 16Sおよび23S rRNA 2 µgにEthachinmateを3 µl加え、37°Cで16時間インキュベートした後、アガロースゲル電気泳動し、そのパターンに変化のないことを確認する。
  

Q2. RNAの回収に使用できますか?

[A2] RNAの回収に問題なく使用できます。

Q3. 効率良く回収できる核酸の濃度と長さは?

[A3] 20 ng/ml以上のDNA(100 bp以上)およびRNA(120 base以上)を、ほとんど回収することができます。

Q4. 260 nmの吸光度測定による定量に影響しますか?

[A4] 影響しません。

Q5. プロトコルでは、DNA溶液100 µlに対してEthachinmateを1 µl加えることになっていますが、DNA溶液が100 µlより少ない場合はどうすれば良いですか?

[A5] Ethachinmateは1 µl加えて下さい。DNA沈殿を可視化するためには1 µl以上のEthachinmateが必要です。なお、添付の3M Sodium Acetateは比例換算して適量を加えて下さい。
例 : DNA溶液50 µlの場合、3M Sodium Acetate 1.7 µl, Ethachinmate 1 µl

Q6. DNA溶液が300 µl以上の場合の添加量は?

[A6] DNA溶液が300 µl以上の場合、EthachinmateはDNA溶液の量に関係なく3 µl加えて下さい。Ethachinmateを過剰に加える必要はありません。なお、添付の3M Sodium Acetateは比例換算して適量を加えて下さい。
例 : DNA溶液600 µlの場合、3M Sodium Acetate 19.8 µl, Ethachinmate 3 µl

Q7. DNA溶液を2回以上エタノール沈澱する場合には、2回目以降にもEthachinmateをその都度加えた方が良いですか?

[A7] Ethachinmateは一度添加したらその後追加する必要はありません。Ethachinmateを繰り返し加えるとDNA溶液が粘稠になり、以後の操作に支障を来す場合があります。

Q8. 凍結させた場合、Ethachinmateの効果に影響はありますか?

[A8] ありません。

Q9. オートクレーブ処理した場合、Ethachinmateの効果に影響はありますか?

[A9] ありません。

Q10. Ethachinmateを含むDNA溶液をフェノール/クロロホルム処理した場合、Ethachinmateの効果に影響はありますか?

[A10] ありません。

Q11. 電気泳動パターンに対する影響はありますか?

[A11] ありません。ただし、電気泳動条件によっては、数十kbp以上のDNAのバンドがブロードになることがあります。

Q12. 制限酵素反応に対する影響はありますか?

[A12] ありません。

Q13. T4 DNA Ligaseの反応に対する影響はありますか?

[A13] ありません。

Q14. AMV Reverse TranscriptaseのcDNA合成反応に対する影響はありますか?

[A14] ありません。

Q15. Taq DNA PolymeraseによるPCRに対する影響はありますか?

[A15] ありません。

Q16. Klenow Flagmentの反応に対する影響はありますか?

[A16] ありません。

Q17. 大腸菌の形質転換に対する影響はありますか?

[A17] ありません。エレクトロポレーションにおいても影響しません。 ただし、大腸菌に導入するligation product溶液中に、Ethachinmate、PEG6000、ポリアミンが混在する場合、形質転換効率が低下することがありますのでご注意ください。

Q18. in vitroパッケージングに対する影響はありますか?

[A18] λファージのin vitroパッケージング効率は若干低下します。

Q19. Ethachinmateを加えてエタノール沈澱するとモノヌクレオチドは沈殿しますか?

[A19] 8 merおよび17 merのオリゴヌクレオチドを用いた実験では、Ethachinmate添加の有無に関わらず、回収率に変化はありません。

Q20. ホルムアミドを含むハイブリダイゼーション溶液中で変性しますか?

[A20] 変性しません。

Q21. ブロッティングに影響はありますか?

[A21] ありません。

Q22. シークエンス反応に影響はありますか?

[A22] ABI Prism® 377を用いたサイクルシークエンス反応には影響しません。ダイデオキシ法によるシークエンス反応にも影響はありません。

Q23. Ethachinmateを添加すると沈殿がチューブからはがれやすくなってしまうことはありますか?

[A23] チューブの材質によります。例えば、エッペンドルフ社製のSafe-Lockチューブははがれやすい傾向があります。

Q24. Ligation-Convenience Kitと併用する場合の注意事項はありますか?

[A24] 形質転換に影響を与える場合がございます。詳しくは次のページ EthachinmateとLigation-Convenience Kitを併用した場合の形質転換への影響 をご参考ください。

Ethachinmate リーフレット [No. 172] 　（こちらからPDFファイルをダウンロードできます。992KB）