GENEPURE

GENEPURE(ジーンピュア)は、よう化ナトリウムのアガロースゲル融点降下作用とシリカマトリックスのDNA特異的吸着性を利用したアガロースゲルからのDNA回収用キットである。本品は特別に調製したシリカマトリックスを使用しているため、高純度のDNAを70〜90%*回収できる上、低融点タイプ以外のアガロースやTBEバッファーでも使用できる。しかも操作が簡単で約45分間でDNAを回収できる。

*回収率はDNA量によって若干異なる。1アガロースゲルブロック当たり5µg以上の場合には、Solution IIの量を増やすか、あるいはゲルブロックを数個に分けて処理する必要がある。

内容	組成	容量
Solution I	Nal solution	100 ml
Solution II	silica matrix	2 ml
Solution III	wash buffer	11 ml**

**滅菌蒸留水およびエタノールを加えて使用する。

Agarose S (0.7〜1.5%) から切りだしたDNAフラグメント注1)
↓(1.5 ml　微量遠心チューブ)
↓←Solution I 切りだしたゲルの2〜3倍量
↓インキュベート (55°C, 15分間)注2)
↓Solution II 20 µl
↓室温, 5分間 (途中2〜3分間ごとに撹拌 注3))
↓遠心分離 (12K×g, 室温, 1分間)
沈殿
↓Solution I 注4) 400µl
↓撹拌 注3)
↓遠心分離 (10K×g, 室温, 1分間)
沈殿
↓←調製したSolution III (4°C)注5) 500 µl
↓撹拌 注3)
↓遠心分離 (10K×g, 4°C, 1分間)
沈殿
↓←調製したSolution III (4°C)注5) 500 µl
↓撹拌 注3)
↓遠心分離 (10K×g, 4°C, 1分間)
沈殿
↓ddH2O 30 µl
↓撹拌 注6)
↓55°C, 5分間
↓遠心分離 (12K×g, 室温, 3分間)→→→上清(1)
沈殿
↓ddH2O 30 µl
↓撹拌 注6)
↓55°C, 5分間
↓遠心分離 (12K×g, 室温, 3分間)
上清(2)
↓上清(1)と上清(2)をまとめる
DNA溶液

• 注 1) 切り出したゲルの重量をを計っておく。
• 注 2) Agarose L(低融点タイプ)の場合は5分間でよい。
• 注 3) 数回転倒混和する。
• 注 4) この処理は残存しているアガロースゲルを再融解させるための処理なので、低融点タイプアガロースを用いた場合には必ずしも行わなくてよい。
• 注 5) 使用前にあらかじめSolution III に滅菌蒸留水およびエタノールを加え、氷冷しておいたものを用いる。
• 注 6) 指ではじく。

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*** 第二版(2002.07.01) ***

アガロースゲルからのDNA回収例

pUC18 DNA 10 µgを制限酵素で切断し、1% Agarose Lにて電気泳動した後、GENEPUREにより目的のDNAフラグメントを回収し、1/10量(〜1 µg)を泳動した。

Lane 1	Marker 6(λ/Sty I) 1 µg
Lane 2	pUC18/Dra I 1 µg
Lane 3	pUC18/Dra I より692bpのDNAバンドを切りだし、GENEPUREにより回収したもの
Lane 4	pUC18/Taq I 1 µg
Lane 5	pUC18/Taq I より476bpのDNAバンドを切りだし、GENEPUREにより回収したもの
Lane 6	pUC18/Pvu II 1 µg
Lane 7	pUC18/Pvu II より322bpのDNAバンドを切りだし、GENEPUREにより回収したもの
Lane 8	pUC18/Rsa I 1 µg
Lane 9	pUC18/Rsa I より241bpのDNAバンドを切りだし、GENEPUREにより回収したもの
Lane 10	Marker 6(λ/Sty I) 1 µg