~GMO DNA Extraction Kit for Grain~
Code No. |
包装単位 |
希望納入価格 |
| 317-06361 | 50回用 |
36,000円 |
>特長 >キット内容 >使用方法 >実験例 >マニュアル >MSDS >関連製品 >English
■GM quickerは、厚生労働省「平成18年6月29日付け食安発第0629002号」において「組換えDNA技術応用食品の検査方法」におけるトウモロコシ、ダイズからのDNA抽出精製方法に収載されました。
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GM quickerは、トウモロコシやダイズなどの穀粒からDNAを抽出するためのキットです。本キットは、カオトロピックイオン存在下でDNAがシリカへ吸着する原理(Boom Technology)を採用しており、抽出操作にフェノールやクロロホルムなどの毒性有機溶媒を使用しません。遺伝子組換え作物(Genetically Modified Organisms:GMO)の検査においては、DNAを用いた方法が広く普及していますが、これまでの植物DNA抽出キットは抽出対象を「葉」としていたため、トウモロコシやダイズなどの穀粒からのDNA抽出には必ずしも効率的ではありませんでした。
本キットでは、抽出対象を穀粒へ特化させることによって、約45分間という短い時間で高い精製度のDNAを抽出することができます。また、本キットは検査用試料の調製におけるクロスコンタミネーションなど、抽出操作上の問題に配慮した設計となっています。さらに、本キットで使用するスピンカラムは、カラム容積を最大限確保しており、内封されたシリカゲル膜は、充分なDNA吸着容量と高い溶出効率を確保しています。
・穀粒から約45分で高精製度のDNAを抽出することができる
・抽出操作にフェノールやクロロホルムなどの毒性有機溶媒を使用しない
・試料のクロスコンタミネーション防止に配慮したキット設計を行っている
・抽出したDNAはPCRや制限酵素反応にそのまま使用することができる
構成品名 容量 保存GE1 Buffer 100 ml × 3本室温保存(15~25℃) GE2 Buffer 37.5 ml × 1本室温保存(15~25℃) GB3 Buffer 12.5 ml × 1本室温保存(15~25℃) GW Buffer 40 ml × 1本室温保存(15~25℃) TE(pH8.0) 10 ml × 1本室温保存(15~25℃) RNase A(100mg/ml) 0.5 ml × 2本室温保存(15~25℃) Spin Column 50 個冷蔵保存(2~10℃) マニュアル 1部 -
- RNase A は室温保存が可能ですが、長期間ご使用にならない場合には、冷蔵保存(2~8℃)をお奨めいたします。
- GW Buffer にはエタノールが含まれていますので、ご使用号は蒸発を防ぐために必ず蓋を閉めてください。
- 構成品のSpin Columnは冷蔵保存(2~10℃)した方が高いDNA収量を維持することが可能です。キットに含まれる「Spin Column」の保存条件を、室温保存(15~25℃)から冷蔵保存(2~10℃)へ 変更致します。(2007.12.3)
使用法1: トウモロコシからのDNA抽出
- トウモロコシ種子をフードミル等で粉砕し、トウモロコシ粉末試料を調製する。
- 50 ml チューブで1.0 g のトウモロコシ粉末試料を秤量し、6 ml のGE1 Buffer および20 µl のRNase A をそれぞれ添加する。ボルテックスミキサーにて30 秒間攪拌する。
- 10分間室温で静置する。
- 750 µl のGE2 Buffer を添加し、10~12回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。
- 10 分間氷冷する。
- 遠心(≧5K×g, 10 分間, 4℃)する。
- 上清4 ml 程度を新しい50 ml チューブに移す。
- 7で回収した上清から400 µl を1.5 ml マイクロチューブに移し,残った上清は4℃で保存する。
- 50 µl のGB3 Buffer を添加する。
- 200 µl のエタノールを添加し、10~12 回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。
- 10の混合液をSpin Column に全量移し、遠心(13K×g, 30 秒間, 4℃)し、濾液は廃棄する。
- 600 µl のGW Buffer をSpin Column に添加した後、遠心(13K×g, 60 秒間, 4℃)し、濾液は廃棄する。
- Spin Column を新しい1.5 ml マイクロチューブに移す。
- 50 µl のTE(pH8.0)を滴下した後、3 分間室温で静置する。
- 遠心(13K×g, 60 秒間, 4℃)し、濾液を回収する。
使用法2: ダイズからのDNA抽出
- ダイズ種子をフードミル等で粉砕し、ダイズ粉末試料を調製する。
- 50 ml チューブで1.0 g のダイズ粉末試料を秤量し、12 ml のGE1 Buffer および40 µl のRNase A をそれぞれ添加する。ボルテックスミキサーにて30 秒間攪拌する。
- 10 分間室温で静置する。
- 1.5 ml のGE2 Buffer を添加し、10~12 回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。
- 10 分間氷冷する。
- 遠心(≧5K×g, 10 分間, 4℃)する。
- 上清8 ml 程度を新しい50 ml チューブに移す。
- 7で回収した上清から700 µl を2.0 ml マイクロチューブに移し,残った上清は4℃で保存する。
- 250 µl のGB3 Buffer を添加する。
- 250 µl のイソプロパノールを添加し、10~12 回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。
- 10で得られた600 µl の混合液をSpin Column に移し、遠心(13K×g, 30 秒間, 4℃)し、濾液は廃棄する。
- 10で得られた残りの混合液全量を11のSpin Column に移し、遠心(13K×g, 30 秒間, 4℃)し、濾液は廃棄する。
- Spin Column に600 µl のGW Buffer を添加した後、遠心(13K×g, 60 秒間, 4℃)し、濾液は廃棄する。
- Spin Column を新しい1.5 ml マイクロチューブに移す。
1. トウモロコシおよびダイズ種子からのDNA 抽出
本キットを用いてトウモロコシおよびダイズの種子からDNA 抽出を行った。
いずれの種子からもDNA を抽出することができた。本キットで抽出したDNA の1/25 量を1% Agarose S で電気泳動した。
[電気泳動写真]
1 2 34 5 6 7 8 Lane 1, 8 :OneSTEP Marker 6(λ/ StyⅠ digest)
Lane 2~4 :トウモロコシgenomic DNA
Lane 5~7 :ダイズgenomic DNA2. トウモロコシおよびダイズ種子から抽出したDNA の制限酵素消化
本キットで抽出したDNA を制限酵素EcoRⅠ およびHindⅢ で消化した。
[電気泳動写真]
1 2 34 5 6 7 8 Lane 1、8:OneSTEP Marker6 (λ/ Sty I digest)
Lane 2 :トウモロコシgenomic DNA intact
Lane 3 :トウモロコシgenomic DNA digest / EcoR I
Lane 4 :トウモロコシgenomic DNA digest / HindIII
Lane 5 :ダイズgenomic DNA intact
Lane 6 :ダイズgenomic DNA / EcoR I
Lane 7 :ダイズgenomic DNA / Hind III3. PCR による内在性遺伝子の検出
トウモロコシおよびダイズの内在性遺伝子検出用プライマーを用いて、本キットで抽出したDNA のPCR を行った。
PCR 条件は、農林水産省「組換え食品検査・分析マニュアル」に従った。
[電気泳動写真]
1 2 34 5 6 7 8 Lane 1, 8 :OneSTEP Marker 11(pUC19/MspⅠdigest)
Lane 2~4 :トウモロコシgenomic DNA を鋳型にSSIIb 遺伝子を増幅(151 bp)
Lane 5~7 :ダイズgenomic DNA を鋳型にLe1 遺伝子を増幅(118 bp)
製品添付マニュアルをご覧になるにはAdobe ReaderやAdobe Acrobat Plug-in等、PDFを表示できるソフトウェアが必要です。
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GM quicker 構成品のBuffer(単品販売あり)と組合せて使用することにより、大型機器(遠心分離機等)を利用することなく、植物組織からDNAを迅速に抽出・精製することが可能になる、2種類のカラムセットが発売となりました。(2010.4.1)
Code No. 製品名 包装単位 希望納入価格 317-07341 20回用 35,000円
Code No. 製品名 包装単位 希望納入価格 317-06361GM quicker 50回用 36,000円 317-07341 20回用 35,000円 310-06591GM quicker 2 50回用 43,000円 311-07241GM quicker 3 50回用 54,000円 319-07161GM quicker 96 96 ウェルプレート×4 120,000円 314-06371GE1 Buffer 500ml 12,000円 311-06381GE2 Buffer 200ml 8,000円318-06651 GE2-K Buffer 100 ml 8,000円 315-06661GB3 Buffer 25ml 8,000円 311-06641GW Buffer 80ml 8,000円 318-06391RNase A (100mg/ml) 2.5ml 19,600円316-90025 TE (pH8.0) 500ml 9,000円312-06671 GM quicker 2 Enzyme Set
(Proteinase K:2ml, α-Amylase:0.1ml×2) 1set 20,000円
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