～GMO DNA Extraction Kit for Grain～
Code No. |
包装単位 |
希望納入価格 |
| 317-06361 | 50回用 |
36,000円 |
＞特長 ＞キット内容 ＞使用方法 ＞実験例 ＞マニュアル ＞MSDS ＞関連製品 ＞English
■GM quickerは、厚生労働省「平成18年6月29日付け食安発第0629002号」において「組換えDNA技術応用食品の検査方法」におけるトウモロコシ、ダイズからのDNA抽出精製方法に収載されました。
GM quickerは、トウモロコシやダイズなどの穀粒からDNAを抽出するためのキットです。本キットは、カオトロピックイオン存在下でDNAがシリカへ吸着する原理（Boom Technology）を採用しており、抽出操作にフェノールやクロロホルムなどの毒性有機溶媒を使用しません。遺伝子組換え作物（Genetically Modified Organisms：GMO）の検査においては、DNAを用いた方法が広く普及していますが、これまでの植物DNA抽出キットは抽出対象を「葉」としていたため、トウモロコシやダイズなどの穀粒からのDNA抽出には必ずしも効率的ではありませんでした。
本キットでは、抽出対象を穀粒へ特化させることによって、約45分間という短い時間で高い精製度のDNAを抽出することができます。また、本キットは検査用試料の調製におけるクロスコンタミネーションなど、抽出操作上の問題に配慮した設計となっています。さらに、本キットで使用するスピンカラムは、カラム容積を最大限確保しており、内封されたシリカゲル膜は、充分なDNA吸着容量と高い溶出効率を確保しています。
・穀粒から約45分で高精製度のDNAを抽出することができる
・抽出操作にフェノールやクロロホルムなどの毒性有機溶媒を使用しない
・試料のクロスコンタミネーション防止に配慮したキット設計を行っている
・抽出したDNAはPCRや制限酵素反応にそのまま使用することができる
GE1 Buffer 室温保存（15～25℃） GE2 Buffer 室温保存（15～25℃） GB3 Buffer 室温保存（15～25℃） GW Buffer 室温保存（15～25℃） TE（pH8.0） 室温保存（15～25℃） RNase A(100mg/ml) 室温保存（15～25℃） Spin Column 冷蔵保存（2～10℃） マニュアル
- RNase A は室温保存が可能ですが、長期間ご使用にならない場合には、冷蔵保存（2～8℃）をお奨めいたします。
- GW Buffer にはエタノールが含まれていますので、ご使用号は蒸発を防ぐために必ず蓋を閉めてください。
- 構成品のSpin Columnは冷蔵保存（2～10℃）した方が高いDNA収量を維持することが可能です。キットに含まれる「Spin Column」の保存条件を、室温保存（15～25℃）から冷蔵保存（2～10℃）へ 変更致します。（2007.12.3）
使用法１： トウモロコシからのDNA抽出
- トウモロコシ種子をフードミル等で粉砕し、トウモロコシ粉末試料を調製する。
- 50 ml チューブで1.0 g のトウモロコシ粉末試料を秤量し、6 ml のGE1 Buffer および20 µl のRNase A をそれぞれ添加する。ボルテックスミキサーにて30 秒間攪拌する。
- 10分間室温で静置する。
- 750 µl のGE2 Buffer を添加し、10～12回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。
- 10 分間氷冷する。
- 遠心（≧5K×g, 10 分間, 4℃）する。
- 上清4 ml 程度を新しい50 ml チューブに移す。
- 7で回収した上清から400 µl を1.5 ml マイクロチューブに移し，残った上清は4℃で保存する。
- 50 µl のGB3 Buffer を添加する。
- 200 µl のエタノールを添加し、10～12 回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。
- 10の混合液をSpin Column に全量移し、遠心（13K×g, 30 秒間, 4℃）し、濾液は廃棄する。
- 600 µl のGW Buffer をSpin Column に添加した後、遠心（13K×g, 60 秒間, 4℃）し、濾液は廃棄する。
- Spin Column を新しい1.5 ml マイクロチューブに移す。
- 50 µl のTE（pH8.0）を滴下した後、3 分間室温で静置する。
- 遠心（13K×g, 60 秒間, 4℃）し、濾液を回収する。
使用法２： ダイズからのDNA抽出
- ダイズ種子をフードミル等で粉砕し、ダイズ粉末試料を調製する。
- 50 ml チューブで1.0 g のダイズ粉末試料を秤量し、12 ml のGE1 Buffer および40 µl のRNase A をそれぞれ添加する。ボルテックスミキサーにて30 秒間攪拌する。
- 10 分間室温で静置する。
- 1.5 ml のGE2 Buffer を添加し、10～12 回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。
- 10 分間氷冷する。
- 遠心（≧5K×g, 10 分間, 4℃）する。
- 上清8 ml 程度を新しい50 ml チューブに移す。
- 7で回収した上清から700 µl を2.0 ml マイクロチューブに移し，残った上清は4℃で保存する。
- 250 µl のGB3 Buffer を添加する。
- 250 µl のイソプロパノールを添加し、10～12 回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。
- 10で得られた600 µl の混合液をSpin Column に移し、遠心（13K×g, 30 秒間, 4℃）し、濾液は廃棄する。
- 10で得られた残りの混合液全量を11のSpin Column に移し、遠心（13K×g, 30 秒間, 4℃）し、濾液は廃棄する。
- Spin Column に600 µl のGW Buffer を添加した後、遠心（13K×g, 60 秒間, 4℃）し、濾液は廃棄する。
- Spin Column を新しい1.5 ml マイクロチューブに移す。
1. トウモロコシおよびダイズ種子からのDNA 抽出
本キットを用いてトウモロコシおよびダイズの種子からDNA 抽出を行った。
いずれの種子からもDNA を抽出することができた。本キットで抽出したDNA の1/25 量を1% Agarose S で電気泳動した。
[電気泳動写真]
4 5 6 7 8 Lane 1, 8 ：OneSTEP Marker 6(λ/ StyⅠ digest)
Lane 2～4 ：トウモロコシgenomic DNA
Lane 5～7 ：ダイズgenomic DNA2. トウモロコシおよびダイズ種子から抽出したDNA の制限酵素消化
本キットで抽出したDNA を制限酵素EcoRⅠ およびHindⅢ で消化した。
[電気泳動写真]
4 5 6 7 8 Lane 1、8：OneSTEP Marker6 (λ/ Sty I digest)
Lane 2 ：トウモロコシgenomic DNA intact
Lane 3 ：トウモロコシgenomic DNA digest / EcoR I
Lane 4 ：トウモロコシgenomic DNA digest / HindIII
Lane 5 ：ダイズgenomic DNA intact
Lane 6 ：ダイズgenomic DNA / EcoR I
Lane 7 ：ダイズgenomic DNA / Hind III3. PCR による内在性遺伝子の検出
トウモロコシおよびダイズの内在性遺伝子検出用プライマーを用いて、本キットで抽出したDNA のPCR を行った。
PCR 条件は、農林水産省「組換え食品検査・分析マニュアル」に従った。
[電気泳動写真]
4 5 6 7 8 Lane 1, 8 ：OneSTEP Marker 11(pUC19/MspⅠdigest)
Lane 2～4 ：トウモロコシgenomic DNA を鋳型にSSIIb 遺伝子を増幅(151 bp)
Lane 5～7 ：ダイズgenomic DNA を鋳型にLe1 遺伝子を増幅(118 bp)
製品添付マニュアルをご覧になるにはAdobe ReaderやAdobe Acrobat Plug-in等、PDFを表示できるソフトウェアが必要です。
GM quicker 構成品のBuffer（単品販売あり）と組合せて使用することにより、大型機器（遠心分離機等）を利用することなく、植物組織からDNAを迅速に抽出・精製することが可能になる、2種類のカラムセットが発売となりました。（2010.4.1）
GM quicker GM quicker 2 GM quicker 3 GM quicker 96 GE1 Buffer GE2 Buffer 318-06651 GE2-K Buffer GB3 Buffer GW Buffer RNase A (100mg/ml) 316-90025 TE (pH8.0) 312-06671 GM quicker 2 Enzyme Set
(Proteinase K：2ml, α-Amylase：0.1ml×2)
Copyright © 2010 NIPPON GENE CO., LTD. All Rights Reserved
