～GMO DNA Extraction Kit for Maize～

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■GM quicker 96 は、厚生労働省 「平成21年6月26日付け食安監発0626008号」において、安全性未審査の遺伝子組換えナタネ（RT73 B.rapa）の暫定検査法（粒確認検査のDNA抽出精製法）に収載されました。

■GM quicker 96は、厚生労働省 「平成21年8月3日付け食安発第0803第8号」において「組換えDNA技術応用食品の検査法について（補足）」の別添 粒単位検査法に収載されました。

GM ｑuicker 96 は、トウモロコシ種子粉砕物からDNA を抽出するためのキットです。本キットは、カオトロピックイオン存在下でDNA がシリカへ吸着する原理（Boom Technology）を採用しており、抽出操作にフェノールやクロロホルムなどの毒性有機溶媒を使用しません。遺伝子組換え作物（Genetically Modified Organisms：GMO）の検査等では、DNAを用いた方法が広く普及していますが、これまでのスピンカラムを用いたDNA抽出法で同時に大量のサンプルを処理することは必ずしも効率的ではありませんでした。 本キットは、抽出対象をトウモロコシ種子へ特化させることによって、96粒の種子から約1.5時間という短い時間で簡便に高品質なDNA を抽出することが可能です。使用するポリスチレン製の96ウェルカラムプレートは、最大1800×g までの遠心力を許容し、内封されたシリカゲル膜は、充分なDNA吸着容量を確保しています。 本キットによって抽出されたDNA は、PCRや制限酵素反応等に適用することができます。

構成品名	容量	保存	備考
GE1 Buffer	240 ml × 4本	室温保存（15～25℃）
GE2-K Buffer	150 ml × 1本	室温保存（15～25℃)
GB3 Buffer	120 ml × 1本	室温保存（15～25℃)
GW Buffer	150 ml × 2本	室温保存（15～25℃)	エタノールが含まれていますので、ご使用後は蒸発を防ぐために必ず蓋を閉めて下さい。
TE （pH8.0）	50 ml × 1本	室温保存（15～25℃)
RNase A (100mg/ml)	0.8 ml × 4本	室温保存（15～25℃)	長期間ご使用にならない場合には、冷蔵保存（2～10℃）をお奨めいたします。
96 ウェルカラムプレート	4枚	冷蔵保存（2～10℃）	製品到着後、チャック式袋に密閉した状態で、冷蔵保存（2℃～10℃）して下さい。
1.00 ml コレクションプレート	4枚	室温保存（15～25℃)
0.35 ml コレクションプレート	4枚	室温保存（15～25℃)
コレクションプレートキャップ	4枚	室温保存（15～25℃)
マニュアル	1部	-

使用法１：トウモロコシ種子1 粒（およそ250 mg）からのDNA 抽出プロトコール

1. トウモロコシ種子（1粒）をフードミルまたはビーズ式破砕機等で粉砕する。
   
   
2. トウモロコシ種子粉砕物の入ったチューブに、1.5ml のGE1 Bufferおよび 5 µl のRNase Aをそれぞれ添加する。
   ボルテックスミキサー等にて30 秒間攪拌する。（注1）
   96 サンプルを同時に抽出する場合は、240 ml のGE1 Buffer に対し、予め0.8ｍlのRNase Aを添加し 混合した後すぐに、サンプルの入ったチューブへ1.5mlずつ添加しても良い。（注2）
   
   
3. 10分間、室温で静置する。
   
   
4. 180µl のGE2-K Bufferを添加し、ボルテックスミキサー等にてよく混和する。（注3）
   
   
5. 遠心（1.4～1.8K×g, 10分間, 室温）する。
   
   
6. 上清400µl を新しいマイクロチューブもしくは1ml容96穴プレートに移す。（注4）
   
   
7. 250µlのGB3 Bufferを添加し、マイクロチューブを10～12回激しく転倒させ、よく混和する。
   (1 ml容96穴プレートを使用する場合はピペッティング等にてよく混和する)
   
   
8. キット添付の1.00ml コレクションプレート上に96 ウェルカラムプレートをセットした後、⑦の混合液650µl を96 ウェルカラムプレートへ移す。
   遠心（1.4～1.8K×g, 20 分間, 室温）（注5）した後、濾液はピペットチップで廃棄する。
   
   
9. 650µl のGW Bufferを（1.00ml コレクションプレート上にセットした）96ウェルカラムプレートに添加し、遠心（1.4～1.8K×g, 10 分間, 室温）した後、濾液は廃棄する。
   
   
10. 96ウェルカラムプレートを乾燥させるため、遠心（1.4～1.8K×g, 10 分間, 室温）した後、濾液は廃棄する。
    
    
11. 96ウェルカラムプレートを0.35 ml コレクションプレート上にセットする。
    
    
12. 100µlのTE（pH8.0）を滴下した後、3分間室温にて静置する。
    
    
13. 遠心（1.4～1.8K×g, 10分間, 室温）した後、濾液を回収する。
    サンプルの保存には、付属のコレクションプレートキャップをご使用下さい。
    （コレクションプレートキャップの耐温度は、-80℃～121℃です）

（注1） 攪拌操作が不十分な場合、DNA 収量が著しく減少します。しっかりと攪拌を行って下さい。攪拌が不十分であれば、更に30～60 秒間攪拌を行って下さい。

（注2） GE1 Buffer へRNase A を添加した混合液は、混合後30 分以上経過すると、ＲＮＡの分解効率が著しく低下します。使用後、余った混合液は廃棄し、次のDNA 抽出には使用しないで下さい。

（注3） ②の混合液は粘度が高くなっています。添加したGE2-Ｋ Buffer が十分に混ざるようにしっかりと攪拌を行って下さい。

(注4)　沈殿や浮遊物を可能な限り取らないように上清を回収して下さい。

(注5) 　使用するプレート遠心機の回転数等を確認し、1.8K×g 以上にならないように十分注意して下さい。また、使用するローターがコレクションプレート上にセットした96 ウェルカラムプレートに干渉しないことや、使用するローターのバケットの高さがコレクションプレートと96 ウェルカラムプレートの繋ぎ目よりも高いことを確認して下さい。

製品マニュアルをご覧になるにはAdobe ReaderやAdobe Acrobat Plug-in等、PDFを表示できるソフトウェアが必要です。

　 GM quicker 96 (第1.1版)

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Code No.	製品名	包装単位	希望納入価格
317-06361	GM quicker	50回用	36,000円
317-07341	On-Site Column Set for GM quicker	20回用	35,000円
310-06591	GM quicker 2	50回用	43,000円
311-07241	GM quicker 3	50回用	54,000円
319-07161	GM quicker 96	96 ウェルプレート×4	120,000円
314-06371	GE1 Buffer	500ml	12,000円
311-06381	GE2 Buffer	200ml	8,000円
318-06651	GE2-K Buffer	100 ml	8,000円
315-06661	GB3 Buffer	25ml	8,000円
311-06641	GW Buffer	80ml	8,000円
318-06391	RNase A (100mg/ml)	2.5ml	19,600円
316-90025	TE (pH8.0)	500 ml	9,000円
312-06671	GM quicker 2 Enzyme Set (Proteinase K：2ml, α-Amylase：0.1ml×2)	1set	20,000円

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