Code No.	包装単位	希望納入価格	備考
312-07411	50 回用	48,000円

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本品は土壌からの RNA 抽出キットです。ビーズによる強力な物理的破砕と試薬による溶菌作用を併せることで強力に微生物を破砕し、さらに RNA 抽出液にフッ素化合物を添加することで核酸を効率よく抽出します。また酵素反応を阻害する腐植物質などの夾雑物質を効果的に除去できる精製プロトコールの採用により、簡便に高純度の RNA を精製することができます。これまでは土壌 DNA 抽出キットによって DNA の解析も行われていましたが、DNA は比較的安定な物質であるため土壌に残留しやすく、既に死滅した微生物まで解析している可能性があります。
従って、生きた微生物の評価を行うためには土壌 RNA の抽出が有効です。
本品は日本の土壌からの RNA 抽出に最適化したものであり、
約 4 時間で純度の高い RNA を高収量で抽出できます。

• 火山灰土壌(黒ボク土など)に対応
• 高純度 RNA が効率よく抽出可能
• 約 4 時間の操作時間

構成品 容量 保存 Sodium Silicofluoride Solution *1 10 ml×1本 室温 Lysis Solution R 25 ml×1本 室温 Lysis Solution 20S 1.25 ml×3本 室温 Purification Solution R 25 ml×1本 室温 Precipitation Solution R 35 ml×1本 室温 Ethachinmate 100μl×1本 室温

3M Sodium Acetate (pH5.2) 500μl×1本 室温 TE (pH8.0) 10 ml×1本 室温 Beads Tubes *2 50本 室温 Deoxyribonuclease （RT Grade） 250 U×1本 -20℃ 10×DNase (RT Grade) Buffer 1.0 ml×1本 -20℃ 2mg/ml BSA Solution 1.0 ml×1本 -20℃ 製品マニュアル 1部 －

＊1： Sodium Silicofluoride は毒劇法にて劇物に指定されています。
＊2： 本品をお使い頂くためには、別途 Beads Beater （ビーズ式破砕機） が必要になります。

簡易操作フロー

下記場所で採取した土壌サンプルを使用して①②の実験を行った。

Lane 1	東大弥生圃場対照区土壌 （アロフェン質黒ボク土、火山灰土壌）
Lane 2	東大牧場 牧草地 （アロフェン質黒ボク土、火山灰土壌）
Lane 3	筑波 農業環境技術研究所 （アロフェン質黒ボク土、火山灰土壌）
Lane 4	東大田無農場牧草地 （アロフェン質黒ボク土、火山灰土壌）
Lane 5	草地試験場永年採草地土壌 （灰色低地土、火山灰土壌一部混入）
Lane 6	千葉農試森林土壌 （アロフェン質黒ボク土、火山灰土壌）
Lane 7	兵庫農試森林土壌 （褐色森林土、非火山灰土壌）
Lane 8	富山県 射水市 片口の畑土壌 （非火山灰土壌）
M	RNA Ladder　（Code No. 311-06261）
M11	Marker 11 (pUC19/Msp I digest)　（Code No. 319-03261）

①アロフェン質黒ボク土からのRNA抽出

ISOIL for RNA を使用してアロフェン質黒ボク土を含む土壌 0.5g、0.25g から抽出した RNA 溶液(10μl に溶解)を各 4.7μl 泳動した。0.5g の土壌サンプルは採取後 4℃ 保存で 1 週間経過したもの、0.25g の土壌サンプルは 4℃ 保存で 3 週間経過したものを使用した。

0.5g から抽出した RNA 溶液	0.25g から抽出した RNA 溶液
〔結果〕 基本的には土壌から RNA 抽出できたが、土壌によっては困難な場合がある。	〔結果〕 0.5g からの RNA 抽出が困難であった土壌は、サンプルの添加量を減らしたことで RNA 収量が増加したものもあった。

②RNA溶液のRT-PCR

①の実験 (土壌 0.5g) で得られた RNA 溶液を鋳型とし、RT-PCR で 16S rRNA 領域 (約 200base) を増幅し、
得られた PCR 産物を電気泳動した。

〔結果〕
①の実験で RNA 抽出が困難であった土壌でも、得られたRNA 溶液からは RT-PCR 産物を得ることができた。

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ISOIL for RNA (A4/2枚)

• ISOIL、ISOIL for Beads Beating ・・・ 土壌DNA抽出キット
• ISOIL Large for Beads ver.2 ・・・ 土壌微生物が少ないサンプルから DNA を抽出する場合