ISOIL Large for Beads ・・・土壌 DNA を大量に抽出する場合
ISOIL Large for Beads ver.2 ・・・土壌微生物が少ないサンプルから DNA を抽出する場合

ISOIL Large for Beads

Code No.	製品名	包装単位	希望納入価格
316-06331	ISOIL Large for Beads	6回用	20,000円

ISOIL Large for Beads は 5 g の土壌サンプルから DNA を抽出するためのキットです。
特別な組成の抽出液により、非火山灰土壌はもちろん、これまで困難とされてきた火山灰土壌からも DNA の抽出が可能です。
ISOIL Large for Beads は、DNA の抽出方法として界面活性剤存在下での加熱抽出法と Beads による物理的な菌体破砕法を併用しています。また、特殊な条件下での DNA 沈殿により、従来の方法と比較して、純度の高い土壌 DNA を高濃度で調製することができます。
土壌中の微生物が少ないことが予想される土壌サンプルからのDNA 抽出や、大量の土壌 DNA が必要な場合に最適なキットです。

一回に 5ｇの土壌サンプルから DNA が抽出できる。
DNA 含有量が少ないことが予想される土壌サンプルからの DNA 抽出に適している。
大量の土壌 DNA が必要な場合に適している。
黒ボク土などの火山灰土壌からも効率よく土壌 DNA が抽出できる。
土壌中の腐植物質を効率よく除去できる。
高純度な土壌 DNA が得られる。
得られた土壌 DNA は PCR や制限酵素反応に直接使用できる。

Beads Tubes
6本

Lysis Solution BB
60 ml ×1本

Lysis Solution 20S
3 ml ×1本

Purification Solution
24 ml ×1本

Precipitation Solution
48 ml ×1本

Wash Solution
30 ml ×1本

Ethachinmate
60 µl ×1本

TE(pH 8.0)
6 ml ×1本

マニュアル
1部

5g の土壌サンプルを Beads Tube に入れる。
9.5ml の Lysis Solution BB と 0.5ml の Lysis Solution 20 S を添加する。
最高速度で 10 分間ボルテックスした後、65℃ で 60 分間インキュベートする。
遠心（4K×g, 5 分間, 室温）する。
上清 6 ml を新しい遠沈管に移し、4 ml の Purification Solution を添加し、十分に混合する。
6 ml のクロロホルムを添加し、1 分間ボルテックスした後、遠心（4K×g, 15 分間, 室温）する。
中間層を入れないように注意しながら水層 8 ml を新しい遠沈管に移し、8 ml のPrecipitation Solution を添加して十分に混合し、遠心（8K×g, 60 分間, 4℃）する。
上清を捨て、5ml の Wash Solution を加えて沈殿および遠沈管の壁をリンスし、遠心（8K×g, 10 分間, 4℃）する。
上清を捨て、5ml の 70% エタノールと 10µl の Ethachinmate を加えてボルテックスした後、遠心（8K×g, 10 分間, 4℃）する。
上清を捨て、風乾した後、沈殿を適量（0.5 ml～1 ml 程度）のTE （pH8.0）に溶解する。

　ISOIL Large for Beads(第1版, 2005.2.18)
　製品マニュアルをご覧になるには Adobe Reader や Adobe Acrobat Plug-in 等、PDF を表示できるソフトウェアが必要です。

各種土壌サンプルからのDNA 抽出

本キットを用いて 2 種類の土壌 (5g) から DNA 抽出を行った。

抽出した DNA の 1/100 量を 1% Agarose S で電気泳動した。

1	2	3

.

.

Lane 1. OneSTEP Marker 1（λ/ HindⅢ digest）
Lane 2. 東京大学弥生圃場対照区土壌（アロフェン質黒ボク土/ 火山灰土壌）
Lane 3. 秋田県立大学実験圃場水田土壌（灰色低地土/ 非火山灰土壌）

.

.

.

このページの先頭に戻る

ISOIL Large for Beads ver.2

Code No. 製品名包装単位希望納入価格

312-06791
ISOIL Large for Beads ver.2

8回用

24,000円

Code No.	製品名	包装単位	希望納入価格
312-06791	ISOIL Large for Beads ver.2	8回用	24,000円

Ver.2

ISOIL Large for Beads ver.2 は 5 g の土壌サンプルからDNA を抽出するためのキットであり、既存品 ISOIL Large for Beads に 2 つのオプションプロトコールを加え、より充実した内容にバージョンアップしました。

2 つのプロトコール
①再精製プロトコール・・・これまでのプロトコールでは精製が不十分だった特殊なサンプルについても、高純度な土壌 DNA を調製することが出来ます。
②スケールアップ（20g サンプル処理）プロトコール・・・微量しか DNA が含有していない土壌サンプルに対して、20g までのスケールアップが可能です。

Ver.2

再精製に対応できる十分量の試薬が付いています。
20ｇまでのスケールアップが可能！
DNA を吸着してしまう火山灰土壌からも DNA が抽出できる！
腐食物質等の除去に優れ、高純度な土壌 DNA が抽出可能！

Ver.2

Beads Tubes
8本

Lysis Solution BB
80 ml ×1本

Lysis Solution 20S
4 ml ×1本

Purification Solution
45 ml ×1本

Precipitation Solution
90 ml ×1本

Wash Solution
45 ml ×1本

Ethachinmate
100 µl ×1本

TE(pH 8.0)
10 ml ×1本

マニュアル
1部

Ver.2

抽出ステップ

土壌試料を Beads Tube にいれる
←Lysis Solution BB 、 Lysis Solution 20S 添加 , ボルテックス（最高速度、 10 分間）
インキュベート（65℃ 、 60分間）
遠心（4,000 ×g , 5分間 , 室温）

上清を回収する

精製ステップ

←Purification Solution 添加 , 混合　　　　
←クロロホルム添加 , ボルテックス（ 1分間）
遠心（4,000 ×g , 15分間 , 室温）

　　　3.水層（上層）を回収する

←Precipitation Solution 添加
遠心（8,000 ×g , 10分間 , 4℃）

　　　4.沈殿物（DNA) を残し、上清を捨てる

←Wash Solution でリンスを行う
遠心（8,000 ×g , 10分間 , 4℃）

　　　5.沈殿物を残し、上清を捨てる

←70％エタノール、Ethachinmate 添加、ボルテックス
遠心（8,000 ×g , 10分間 , 4℃）

　　　6.沈殿物（DNA) を残し、上清を捨てる

乾燥
←TE (pH.8.0に溶解）

　　　7.「精製ステップ」をもう一度行う

　　　8.土壌 DNA 抽出完了

Ver.2

【再精製プロトコールの効果】

東京大学　弥生圃場　対照区　（黒ボク土）

東北農業研究センター内圃場　畑　（黒ボク土）

【結果】再精製することで、より高純度の土壌 DNA が得られた。再精製プロトコルによる DNA の回収率は約70%。

このページの先頭に戻る

Ver.2

　ISOIL Large for Beads ver.2 (第1版, 2007.8.3)
　製品マニュアルをご覧になるには Adobe Reader や Adobe Acrobat Plug-in 等、PDF を表示できるソフトウェアが必要です。

ISOIL、ISOIL for Beads Beating における土壌 DNA 抽出法は東京大学 TLO が特許出願中です。
ニッポンジーンは、土壌 DNA 抽出法に関して東京大学 TLO よりライセンスを受けています。

Beads Tubes	6本
Lysis Solution BB	60 ml ×1本
Lysis Solution 20S	3 ml ×1本
Purification Solution	24 ml ×1本
Precipitation Solution	48 ml ×1本
Wash Solution	30 ml ×1本
Ethachinmate	60 µl ×1本
TE(pH 8.0)	6 ml ×1本
マニュアル	1部

Beads Tubes	8本
Lysis Solution BB	80 ml ×1本
Lysis Solution 20S	4 ml ×1本
Purification Solution	45 ml ×1本
Precipitation Solution	90 ml ×1本
Wash Solution	45 ml ×1本
Ethachinmate	100 µl ×1本
TE(pH 8.0)	10 ml ×1本
マニュアル	1部

【再精製プロトコールの効果】
東京大学　弥生圃場　対照区　（黒ボク土）	東北農業研究センター内圃場　畑　（黒ボク土）


【結果】再精製することで、より高純度の土壌 DNA が得られた。再精製プロトコルによる DNA の回収率は約70%。