本製品は、アデノウイルスベクター作製用コスミドDNAです。
本製品で用いている「クローン化ゲノム導入法」は、COS-TPC法よりも簡便で廉価なアデノウイルスベクターの作製法です。

■本アデノウイルスベクター作製用コスミドDNAは、Swa I処理済みの製品であり、すぐにインサートの導入を行うことができます。

■[pAxCAwtit2 DNA]および[pAxcwit2 DNA]は、Nsp V(Csp 45 I ) 以外にPac I でもアデノウイルスゲノムを切り出すことができます。これにより、従来品では挿入したい目的遺伝子内にNsp V(Csp 45 I ) サイトが存在するため、完全長ゲノムDNA導入法が利用できなかった遺伝子についても本コスミドベクターを用いることによって完全長ゲノムDNA導入法の応用が可能になりました。

■[ pAxEFwtit2]は[pAxCAwtit2]とプロモーター配列が異なるものになります。pAxCAwtit2はCAGプロモーター、pAxEFwtit2はEF-1αプロモーターを持ちます。

≪使用用途≫
・pAxCAwtit2・・・培養細胞系での実験
・pAxEFwtit2・・・ マウス、特に肝臓での発現を目的とした実験

試験研究用試薬です。
医薬品の用途には使用できません。

本コスミドベクターは東京大学 斎藤泉博士らによって開発されました。

• COS-TPC法で必要とされていた親ウイルスDNA(DNA-TPC)を使用しませんので、親ウイルスの産製が抑えられバックグラウンドが低くなります。
• コスミドベクターに直接クローニングできます。シャトルベクターは不要です。
• Swa I処理済みの製品であり、すぐにインサートの導入を行うことができます。

製品名	構成品	容量（5回分）
pAxCAwtit2 DNA/RE Treatment	pAxCAwtit2/SwaⅠ	10 µg (0.5 µg/µl)
	pAxCAiLacZit/Nsp Ⅴ	10 µg (0.5 µg/µl)
pAxcwit2 DNA/RE Treatment	pAxcwit2/SwaⅠ	10 µg (0.5 µg/µl)
	pAxCAiLacZit/Nsp Ⅴ	10 µg (0.5 µg/µl)
pAxEFwtit2 DNA/RE Treatment	pAxEFwtit2 /Swa I	10 µg (0.5 µg/µl)
	pAxCAiLacZit /Nsp V	10 µg (0.5 µg/µl)

大包装（5回分×3）は、上記包装が3セットのパッケージとなります。

-20°C
（コスミドを導入した大腸菌液をグリセロールストックなどで保存することは避け、DNAとして保存して下さい。アデノウイルスゲノムやスペーサー部分に欠失が起こり、パッケージングできなくなる可能性があります。）

本製品に目的遺伝子を組み込んだ後、アデノウイルスゲノムに隣接する制限酵素サイト(Nsp Vなど)で切断して293細胞に導入するだけで、目的のアデノウイルスベクターを作製することができる方法です。

ΔE1A·E1B,ΔE3 : アデノウイルス遺伝子の欠失 cos : ラムダファージcos部位 ori : プラスミド複製開始点 Apr : アンピシリン耐性遺伝子

[pAxCAwtit2]

CAGプロモーター・poly A配列ユニットを持ち、クローニング部位としてSwa I部位とCla I部位があり、クローニング部位の下流にはすべてのフレームに終止コドンを挿入してあります。目的とするcDNAを組込み、CAGプロモーターを利用するタイプのコスミドベクターです。

 

[pAxcwit2]

クローニング部位としてSwa I部位とCla I部位を持ちます(Cla I-Swa I-Cla I)。発現単位(プロモーター、cDNA、polyA部位)を組込むタイプのコスミドベクターです。

 

[pAxEFwtit2]

EF-1αプロモーター・ polyA 配列ユニットを持ち、クローニング部位として Swa Ⅰ部位と、 Cla Ⅰ部位を持っています。また、クローニング部位の下流にはすべてのフレームに終止コドンが挿入されており、目的とする cDNA を組込み、 EF-1αプロモーターを利用するタイプのコスミドベクターです。

このカセットではEF1αプロモーターが左向きに挿入されており、 作製されるベクターは動物実験で炎症をおこしにくい低炎症型ベクターとなります（文献3）。

 

[pAxCAiLacZit]

pAxCAwtitにLacZを導入したコントロール用コスミドです。

• pAxCAwtit2 DNA
• pAxcwit2 DNA
• pAxEFwtit2 DNA
• pAxCAiLacZit DNA

コスミドベクターに目的遺伝子を組み込む ↓ パッケージング ↓ 大腸菌に導入 ↓ コロニーセレクション、インサートチェック ↓ コスミドベクターの大量調製 ↓ Nsp V(またはCsp45 I)で切断 ↓ 293細胞にtransfection ↓ 組換えアデノウイルスが産生 ↓ ウイルス回収

本コスミドは従来のCOS-TPC法にも使用できます。

マニュアルのページへ

• 本品は試験研究用試薬ですので、医薬品、その他の目的にはご使用になれません。また、試薬についての基本的な知識のある方以外は取り扱わないでください。
• 本製品を工業目的に使用される場合は、個別にライセンス契約の締結が必要です。
• 本品のお取り扱いは、マニュアル記載内容通りに行って下さい。
• 細胞にトランンスフェクションして得られたアデノウイルスは293細胞以外の細胞では増殖できないため伝播性はありません。 しかし、ヒト、マウス、ラットなどのほとんどの細胞へ感染します。したがって、アデノウイルスを扱う際には、平成 16 年 2 月 19 日に施行された「遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律」および所属組織における安全管理規定に従い、しかるべき施設で実験を行って下さい 。
• 本製品の平成 16年文部科学省・環境省令1号「研究開発等に係る遺伝子組換え生物等の第二種使用等に当たって執るべき拡散防止措置等を定める省令」に定められる拡散防止措置は、原則 P2 レベルとなります。また、挿入する核酸供与体によってはP3レベルになることもあります。
• マニュアル記載内容と異なったお取り扱いによるトラブルにつきましては、弊社では責任を負いかねます。
• 本品の御使用は日本国内のみに限らせていただきます。海外では特許の関係上、御使用になれませんのでご注意下さい。

1. 寺島美保、近藤小貴、鐘ヶ江裕美、斎藤泉 (2003) 実験医学 21 , 931-936
2. Miyake, S. et al. (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93 , 1320-1324
3. Nakai, M. et al. (2007) Hum. Gene Ther. 18 , 925-936
4. 鐘ヶ江裕美、斎藤泉 (2003) 『新訂　新遺伝子工学ハンドブック改訂第 4 版』 pp166-173, 羊土社
5. 佐藤友美、鐘ヶ江裕美、斎藤泉 (1997) 『遺伝子導入 & 発現解析実験法』 pp27-42, 羊土社
6. Kanegae, Y. et al. (1994) Jpn. J. Med. Sci. Biol. 47 , 157-199
7. Fukuda, H. et al. (2006) Microbiol. Immunol. 50, 643-654
8. Kim, DW. et al. (1990) Gene 91 , 217-223

Code No.	製品名	包装単位	希望納入価格
311-06141	Swa I	60 units	9,000円
317-06143		60 units×5	29,000円
315-06144		60 units×10	52,000円
312-00912	Nsp V	300 units	9,000円
316-00915		300 units×5	29,000円
314-00916		300 units×10	52,000円
316-90025	TE(pH 8.0)	500 ml	9,000円
313-90091	TE Saturated Phenol	50 ml	9,000円
319-90093		250 ml	13,000円
311-90151	Phenol/Chloroform/Isoamyl alcohol(25 : 24 : 1)	250 ml	15,000円
312-00814	Klenow Fragment	200 units	13,000円
318-00816		200 units×5	52,000円
311-00404	T4 DNA Ligase	50,000 units	9,000円
317-00406		50,000 units×5	36,000円
311-01521	Plasmid Mini Prep Kit	60回分	9,000円
317-01741	LAMBDA INN in vitro packaging Kit	3回分	14,000円