Competent E. coli (E.P.)

≪Competent E.coli の種類とGenotype および形質転換効率≫

Competent E. coli	Genotypeおよび形質転換効率
HB101	Genotype	leuB6, proA2, recA13, thi-1, ara-14, lacY1, galK2, xyl-5, mtl-1, rspL20, supE44, hsdS20, (rB-, mB- at least thi-hsd from Escherichia coli B)
	形質転換効率	pBR322 DNA 0.01ng を用いた場合、1×108 cfu/µg pBR322 DNA以上
JM109	Genotype	endA1, gyrA96, thi, hsdR17, supE44, relA1, Δ(lac-proAB), recA1, F'[traD36, proAB+, laclq, lacZΔM15]
	形質転換効率	pBR322 DNA 0.01 ngを用いた場合、5×108 cfu/µg pBR322 DNA以上
	備考	クローニング部位がlacZ遺伝子中にあるベクターDNAを用いて形質転換を行った際に、X-galおよびIPTGを含む培地でblue/white選択を行うことができる。

Competent E. coli (E.P.) 100 µl
↓氷中にて融解
↓あらかじめ氷冷しておいた1.5 mlマイクロチューブに40 µl移す
↓←Plasmid DNA 0.1 ng (1〜2µl) in TE
↓氷中にて5分間静置
↓あらかじめ氷冷しておいた0.1 cmキュベット注1)に移す
↓electroporation : 2.5 kV-25 µF注1)
↓←Hi-Competent BrothまたはLB Broth(室温)1ml注2)
↓1.5mlマイクロチューブに移す
↓37°C;にて1時間振とう培養または静置
↓選択培地に塗布
↓37°Cにて一晩静置
大腸菌のコロニー

• 注1)ニッポンジーンではBio-Rad社製ジーンパルサーを用いて行っている。パルスコントーラーの抵抗値は、通常200Ωで行っている。
• LB培地でも良いが若干効率が低下する。SOC培地の場合、さらに効率が低下する傾向がある。
  培地添加は、電気パルスを加えた後すみやかに行う。

本品を用いて塩化カルシウム法、ハナハン法で形質転換法を行っても形質転換体は得られません。塩化カルシウム法、ハナハン法の形質転換にはCompetent E. coli HB101(Code No. 318-01313)またはCompetent E. coli JM109 (Code No. 316-01353) をお求め下さい。

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Bottger, E. C. : Bio Technique, 6, 878 (1988)

参考サイト　http://www.atcc.org/