Transformation Kit

　Transformation Kit は効率良く形質転換させるためのキットで高いコンピテンシーを持った大腸菌と専用培地(Hi-Competence Broth, Code No. 319-01343)および Standard plasmid DNA 溶液から構成されている。

1. Competent E. coli * (100 µl×10本)
2. Hi-Competence Broth (1 ml×5本)
3. コントロール用プラスミドDNA** (100 µl×1本)

*Competent E. coli の種類はキットによって異なる。また、Competent E. coli のみの販売もしている。

**宿主がHB101, JM109, DH5の時は[pBR322 DNA]を添付
　 宿主がMV1184の時は[pCU118 DNA]を添付

Competent E. coliの種類とGenotype および形質転換効率

Competent E. coli	Genotypeおよび形質転換効率
HB101	Genotype	leuB6, proA2, recA13, thi-1, ara-14, lacY1, galK2, xyl-5, mtl-1, rspL20, supE44, hsdS20, (rB-, mB- at least thi-hsd from Escherichia coli B)
	形質転換効率	pBR322 DNA 0.1ng を用いた場合、5×107 cfu/µg pBR322 DNA以上
JM109	Genotype	endA1, gyrA96, thi, hsdR17, supE44, relA1, Δ(lac-proAB), recA1, F'[traD36, proAB+, laclq, lacZΔM15]
	形質転換効率	pBR322 DNA 0.1 ngを用いた場合、1×108 cfu/µg pBR322 DNA以上
	備考	クローニング部位がlacZ遺伝子中にあるベクターDNAを用いて形質転換を行った際に、X-galおよびIPTGを含む培地でblue/white選択を行うことができる。
MV1184	Genotype	ara, Δ(lac-proAB), rpsL, thi, (φ80 lacZΔM15), Δ(srl-recA)306::Tn10(tetr), F'[traD36, proAB+, laclq, lacZΔM15]
	形質転換効率	pUC118 DNA 0.1 ngを用いた場合、1×107 cfu/µg pUC118 DNA以上
	備考	クローニング部位がlacZ遺伝子中にあるベクターDNAを用いて形質転換を行った際に、X-galおよび IPTGを含む培地でblue/white選択を行うことができる。
DH5	Genotype	supE44, hsdR17, recA1, gryA96, endA1, thi-1,relA1
	形質転換効率	pBR322 DNA 0.1 ngを用いた場合、5×108 cfu/µg pBR322 DNA以上

 

Competent E. coli (100 µl)
↓氷中にて融解
↓←Plasmid DNA (〜0.1 ng)注1)
↓氷中にて20分間静置
↓42°Cにて45秒間熱処理(水浴使用)
↓氷中にて2分間以上静置
↓全量を400µlのHi-Competence Broth注2)またはLB Broth を含む試験管注3)に移す
↓37°Cにて1時間振とう培養または静置
↓選択培地プレートに塗布注4)
↓37°Cにて一晩静置
大腸菌のコロニー

• 注1)このとき加えるplasmid DNAの容量は約10 µl までにする。10 µl 以上加えてもよいが、効率が下がる場合がある。
• 注2)使用直前に融解し、よく振って一様にした後、competent cellの4倍量を分注してあらかじめ37°Cで保温しておく。
  SOC培地*も使用できる。
  *SOC培地
  • 2%(w/v) Tryptone
  • 0.5%(w/v) Yeast Extract
  • 10 mmol/l NaCl
  • 2.5 mmol/l KCl
  • 10 mmol/l MgCl2
  • 10 mmol/l MgSO4
  • 20 mmol/l Glucose
• 注3)試験管は、なるべく径の大きいものを使用したほうがHi-Competence Brothの効果が高まる。
• 注4)必要であればHi-Competence BrothまたはLB Brothで希釈する。

　Competent E. coliは一度融解すると時間の経過とともに形質転換効率が下がるため、融解後はできるだけ早くご使用ください。
　また、融解後の再凍結保存は避けて下さい。

参考

http://www.atcc.org/

1)Hara, N. et al. : Nucleic Acids Res., 16, 8727(1988)
2)Hanahan, D. : J. Mol. Biol., 166, 557(1983)