Immuno-Aptamer ™ 実験例
Rabbit IgG, Mouse IgG, Rat IgG, Sheep IgG, Goat IgGを用いて、 Immuno-Aptamer™ の特異性についてELISA試験にて検討 した。
Immuno-Aptamer™, Mouse IgGと抗マウスIgG抗体との比較
Immuno-Aptamer™, Rabbit IgG と 抗ラビットIgG抗体との比較
結果： Immuno-Aptamer™ は他種IgGに対する交差性が低く、抗体と比較して高い特異性を示した。
標的タンパク質に対する一次抗体に結合した Immuno-Aptamer™ を、Alkaline Phosphatase （SA-AP）を用いて検出した。検出は化学発光法と発色法で行った。
（A） CDP-Star （Roche No.12 041 677 001） expose 30 sec.
（B） Vector Blue Alkaline Posphatase Substrate Kit Ⅲ（VECTOR LABORATORIES No.SK-5300）
（C） 1-Step NBT/BCIP （Thermo SCIENTIFIC No. 34042)
Immuno-Aptamer™, Mouse IgG
泳動サンプル： Amino-terminal FLAG-BAP Fusion Protein （SIGMA #P7582）
Lane 1： 100 ng
Lane 2： 50 ng
Lane 3： 25 ng一次抗体： ANTI-FLAG M2 Monoclonal Antibody （SIGMA #F3165）
Alkaline Phosphatase： SA-AP （Novagen No.69219-3）
Immuno-Aptamer™, Rabbit IgG
泳動サンプル：Actin タンパク質
Lane 1： 100 ng
Lane 2： 50 ng
Lane 3： 25 ng一次抗体： Actin (C-2) （SANTA CRUZ # sc-8432）
Alkaline Phosphatase： SA-AP （Novagen No.69219-3）
結果： Alkaline Phosphatase を用いて検出した場合でも、化学発光法、発色法どちらの方法においても検出可能であった。
Immuno-Aptamer™, Mouse IgG プロトコール概略
Immuno-Aptamer™, Rabbit IgG プロトコール概略
【実験例】 通常プロトコールと改変プロトコールを用いた場合のデータに差が出るか検証した。
Immuno-Aptamer™, Mouse IgG
泳動サンプル： Amino-terminal FLAG-BAP Fusion Protein （SIGMA #P7582）
（A）通常プロトコール（マニュアル通り）
（B）改変プロトコール（一次抗体と Immuno-Aptamer™ ＋ SA-HRP を事前に結合）Lane 1： 100 ng
Lane 2： 50 ng
Lane 3： 25 ng一次抗体： ANTI-FLAG M2 Monoclonal Antibody （SIGMA #F3165）
Immuno-Aptamer™, Rabbit IgG
泳動サンプル： Actin タンパク質
（A）通常プロトコール（マニュアル通り）
（B）改変プロトコール（一次抗体と Immuno-Aptamer を事前に結合）Lane 1： 100 ng
Lane 2： 50 ng
Lane 3： 25 ng一次抗体： Actin (C-2) （SANTA CRUZ # sc-8432）
結果： 1次抗体と Immuno-Aptamer™ を事前に混合させることで、感度を維持したまま約30分間の時間短縮が可能であった。
