免疫沈降後のウェスタンで目的のタンパク質のみクリアに検出

　本品は、Rabbit IgG または Mouse IgG に対して特異的に結合する Aptamer を使用しています。
この Aptamer は未変性 (native) の IgG にのみ結合し、変性した IgG には結合しません。従って、免疫沈降後のサンプルのウェスタンブロットにおいて抗体の H 鎖や L 鎖のバックグラウンドが検出されず、きれいな結果が得られます。
また、Aptamer の 5' 末端は biotin で修飾されていますので、streptavidin を介した検出が可能です。

Immuno-Aptamer™, Rabbit IgG		Immuno-Aptamer™, Mouse IgG
Immuno-Aptamer™, Rabbit IgG	1本	Immuno-Aptamer™, Mouse IgG	1本
100 × Blocking Reagent	0.8ml×1本	100 × Blocking Reagent	0.8ml×1本
RNase Free Water	1.0ml×1本	RNase Free Water	1.0ml×1本
マニュアル	1部	マニュアル	1部

※本品をご使用になる前に、Immuno-Aptamer™（凍結乾燥品）が入ったチューブにキット添付のRNase Free Water 23μlを添加し、溶解後は、4 ～5μlずつRNase Freeチューブに小分けし、－20℃で保存してください。

●特異性が高い (他種IgGと交差性が低い)

●大幅なプロトコールの変更は不要 (二次抗体から置き換えるだけ)

●未変性(native)のIgGのみを認識　→変性IgG由来のH鎖、L鎖のバンドが邪魔にならない(Data1参照)

【Data1】　Immuno-Aptamer™ を用いた North Western Blot と二次抗体を用いた Western Blot の比較

Lane M : biotinylated MW marker Lane 1 : 抗Actin抗体 Lane 2 : 抗Actin抗体 +Actin Lane 3 : Actin	Lane M : biotinylated MW marker Lane 1 : 抗Flag抗体 Lane 2 : 抗Flag抗体 +Flag-BAP Lane 3 : Flag-BAP

通常の二次抗体を用いた場合、変性したH鎖、L鎖のシグナルが見られるのに対し、本製品を用いた場合、変性したH鎖、L鎖のシグナルが見られず、目的のタンパク質のシグナルのみ検出された。

【簡易 プロトコール 】　

* 　定法に従って SDS-PAGE 、ブロッティングを行う
*　 Immuno-Aptamer ™ を RNase Free Water で溶解する

①	ブロッティング後のメンブレンを TBS-T (Mg) で軽く洗浄
②	メンブレンと Blocking Buffer をハイブリバッグに入れシール
	↓ローテーターでゆっくり回転 (1hr, RT)
③	抗体溶液を準備
④	メンブレンを取り出し、新しいハイブリバッグにメンブレンと③で調製した一次抗体溶液を入れてシール
	↓ローテーターでゆっくり回転 (1hr, RT)
⑤	Immuno-Aptamer ™ 溶液を準備 (Streptavidin-HRP と混合）
⑥	メンブレンをプラスチック容器に移し TBS-T (Mg)を加える	] × 3 回
	↓シーソー式シェーカーで激しく振とう (5min, RT)
⑦	新しいハイブリバッグにメンブレンと⑤で調製した Immuno-Aptamer ™ 溶液を入れてシール
	↓ローテーターでゆっくり回転 (15min, RT)
⑧	メンブレンをプラスチック容器に移し TBS-T (Mg)を加える	] × 3 回
	↓シーソー式シェーカーで激しく振とう (5min, RT)
⑨	ラップの上にメンブレンを置いて HRP 用検出試薬を滴下し、室温で 5 分間放置
⑩	余分な溶液を除き、メンブレンをラップで包む
⑪	X 線フィルムに露光し、フィルムを現像

1. Immuno-Aptamer™ の他種IgGに対する交差性
   
2. Alkaline PhosphataseによるImmuno-Aptamer™検出
   
3. Immuno-Aptamer™ 時間短縮プロトコール

Immuno-Aptamer ™, Rabbit IgG マニュアル（第2版）

Immuno-Aptamer ™, Mouse IgG マニュアル（第2版）

　Immuno-Aptamer ™ リーフレット (No.192)

≪メンブレンについて≫
　使用するメンブレンの種類により、バックグラウンドが高くなることがあります。
　バックグラウンドが高い場合は、Hybond-P（GE ヘルスケア）の使用をお勧めします。

≪使用上の注意≫
　・Immuno-Aptamer ™, Mouse IgG は、mouse IgG1, IgG2a, IgG3 に対して交差性があります。
　・本品は、North-Western 法による検出以外の目的には使用できません。
　・本品は、試験研究用試薬です。医薬品、体外診断などの用途には使用できません。

≪ライセンス情報≫
This product is made under licenses from NEC Soft and SomaLogic, Inc.

Yoshida Y, Sakai N, Masuda H, Furuichi M, Nishikawa F, Nishikawa S, Mizuno H, Waga I, “Rabbit antibody detection with RNA aptamers”, Anal Biochem , 375 , 217-22 (2008)

Sakai N, Masuda H, Akitomi J, Yagi H, Yoshida Y, Horii K, Furuichi M, Waga I, “RNA aptamers specifically interact with the Fc region of mouse immunoglobulin G”, Nucleic Acids Symp Ser (Oxf) , 52 , 487-8 (2008)

1.	Acetylated BSA
2.	100×Blocking Reagent
3.	20×TBS(pH 7.4)
4.	1M MgCl2