In situ Hybridization Reagents(ISHR)

　In situ hybridization(ISH)法は、スライドグラスに固着させた組織切片上で核酸-核酸ハイブリダイゼーションにより、特定の核酸の局在性部位を決定する方法です。特にRNAプローブを用いたISH法は、シグナル/ノイズ比の改良に大変有用です。　しかし、RNAプローブを用いる場合は、操作中に混入したり試料中に存在するRNaseにより組織切片のmRNAやRNAプローブ自体が分解され易いので、注意深い実験操作が要求されます。本品は、RNAプローブを用いたISHを行う場合の組織切片の脱パラフィン、前処理からハイブリダイゼーションおよび洗浄までに必要な調製液を含んでおり、面倒なRNase対策や調製液の希釈操作などは不要です。

【使用回数】

スライドグラス～20枚×5回（パラフィン包埋組織切片の場合）* *凍結組織切片プロトコールの場合、一部の試薬が不足することがあります。不足分については単品でご購入下さい。

試薬名			容量	組成	保存
	ISHR 1	PBS buffer	1 L ×4	0.1 mol/l NaCl, 10 mmol/l りん酸ナトリウム (pH 7.4)	室温
	ISHR 2	PBS (Glycine) buffer	1 L	0.1 mol/l NaCl, 10 mmol/l りん酸ナトリウム (pH 7.4), 2 mg/ml Glycine	室温
	ISHR 3	Acetylation buffer	1 L ×2	0.1 mol/l Triethanolamine (pH 8.0)	室温
[特麻原]	ISHR 4	Acetic anhydride	1 ml×5	Acetic anhydride	室温遮光
	ISHR 5	4×SSC	1 L ×5	0.6 mol/l NaCl, 0.06 mol/l Sodium citrate	室温
	ISHR 6	Proteinase K	5 mg	Proteinase K	2〜10℃
	ISHR 7	Hybridization buffer	465µl×5	50% Formamide, 2×SSC, 1 µg/µl tRNA, 1 µg/µl Salmon sperm DNA, 1 µg/µl BSA, 10% Dextran sulfate	-20℃
	ISHR 8	Hybridization buffer用 DTT	93 mg	DTT (溶解用 H2O 500 µl 添付)	2〜10℃
	ISHR 9	NTE buffer	1 L ×2	0.5 mol/l NaCl, 10 mmol/l Tris-HCl (pH 8.0), 1 mmol/l EDTA	室温
	ISHR 10	RNase A solution	0.40ml×5	10 mg/ml RNase A	-20℃
	ISHR 11	0.1×SSC	1 L ×3	15 mmol/l NaCl, 1.5 mmol/l Sodium citrate	室温

• ISHRには、以下の試薬は含まれていない。
  RNAプローブ調製用試薬、固定液、組織包埋用試薬、スライドコーティング用試薬、エタノール、キシレン、ホルムアミド、ジゴキシゲニン(DIG)標識および検出用試薬、染色試薬、オートラジオグラフィー用試薬
• 欠番となっていたISHR 6はISHR 6 Proteinase Kに変更。
• RNAプローブの調製には「SP6 RNA Synthesis Set」(Code No. 313-02441)、「T3 RNA Synthesis Set」(Code No. 310-02451)、および「T7 RNA Synthesis Set」(Code No.317-02461)を使用できる。

下記の試薬については、単品で購入可能です

試薬名 容量 Code No. 希望納入価格 ISHR 1 PBS buffer 1 L 311-02741 9,000円 ISHR 2 PBS (Glycine) buffer 1 L 318-02751 9,000円 ISHR 3 Acetylation buffer 1 L 315-02761 9,000円 特麻原 ISHR 4 Acetic anhydride 1 ml×5 312-02771 16,000円 ISHR 5 4×SSC 1 L 319-02781 9,000円 ISHR 7 Hybridization buffer 465 µl×5 316-02791 21,000円 ISHR 8 Hybridization buffer用 DTT 93 mg 319-02801 9,000円 ISHR 9 NTE buffer 1 L 316-02811 9,000円 ISHR 10 RNase A solution 0.4 ml×5 313-02821 21,000円 ISHR 11 0.1×SSC 1 L 310-02831 9,000円

●略字記号

[特麻原] : 特定麻薬原料および向精神薬原料に指定されている。

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ISHR Starting Kit