HOTGoldstar DNA Polymerase

本製品はEUROGENTEC社の製造中止に伴い、販売を終了致しました。

 

HOTGoldstar DNA Polymerase はホットスタートPCR 用のDNAポリメラーゼです。
PCR サイクルに入る前に95℃、10 分間の熱処理によって酵素の活性化処理を行います。
本品は、Thermus aquaticus のDNA ポリメラーゼ遺伝子をクローニングし、大腸菌にて発現させ、分離精製した耐熱性DNA ポリメラーゼです。

本酵素を使用することで簡単にホットスタートPCRを行うことができ、以下のようなPCRにおける代表的なトラブルを回避することができます。

• 非特異的な増幅によるバックグラウンド(非特異的なバンド)の発生(ミスプライミング)、
• プライマー二量体(プライマーダイマー)の形成による増幅効率の低下

製造元： EUROGENTEC Bel S.A.

構成品	310-80253	314-80251
HOTGoldstar DNA Polymerase	50 units	500 units
dNTP Mixture (2.5mmol/l each)	160µl×1本	800 µl×2本
10×Reaction Buffer (Mg2+ free)	200µl×1本	1 ml×2本
25mmol/MgCl2	125µl×1本	1.25 ml×1本

【形状】　20 mmol/l Tris-HCl (pH 8.0), 100 mmol/l KCl, 0.1 mmol/l EDTA, 1 mmol/l DTT, 0.5% Tween20, 0.5% Nonidet P40, 50% Glycerol
【活性】　5units/µl

PCRサイクルの前に50°、10分間のインキュベートを行うことによって、ホットスタートPCR用酵素の有効性を確認した。同時に、HOTGoldstar™ DNA Polymeraseと代表的なホットスタートPCR用酵素(A社)との比較も行った。

Materials and Methol

鋳型DNA	Human Genomic DNA (30 ng/50 µl)
プライマー	final 400 nmol/l each 　 　 ・p53 Primer Exon 2, 3 (増幅長356bp) 　 ・p53 Primer Exon 5 (増幅長308bp) 　 ・p53 Primer Exon 7 (増幅長439bp)
酵素量	1.25 units/50 µl
PCR条件	50°C, 10 min..*注1 ↓ 95°C, 10 min.*注2 ↓ [95°C, 30 sec.→65°C, 30 sec.→72°C, 1 min.]×35 Cycles ↓ 72°C, 5 min.
注1 : ホットスタートPCR用酵素の有効性を分かりやすくするために、前記のPCRトラブルが起こりやすい条件でのインキュベートを行った。 注2 : ホットスタートPCR用酵素にのみ行った。

結果	p53 Primer Exon 2, 3 p53 Primer Exon 5 p53 Primer Exon 7     Lane 1, 6, 11 : DNA Marker(OneSTEP Ladder 100 (0.1-2.0kbp)) Lane 2, 7, 12 : 天然型Taq DNAPolymerase Lane 3, 8, 13 : HOTGoldstar™ DNA Polymerase Lane 4, 9, 14 : A社製ホットスタートPCR用酵素 Lane 5, 10, 15 : DNA Marker(OneSTEP Marker 5 (φX174/Hinc II))
	上記泳動写真のように、天然型Taq DNAPolymeraseではミスプライミングやプライマーダイマーが原因と考えられる非特異的増幅産物が確認されたが、ホットスタートPCR用酵素ではそのような非特異的増幅産物は確認されなかった。これによってホットスタートPCR用酵素が前記のPCRトラブルの回避に有効であることが確認された。 　また、HOTGoldstar™ DNA PolymeraseはA社製ホットスタートPCR用酵素と比較して増幅効率が高かった。