Hot-Start Gene Taq

Hot-Start Gene Taq は、耐熱性DNAポリメラーゼです。
宿主菌由来のDNAのコンタミを極力減らした、精製度の高い改変型Taq DNA Polymeraseである「Gene Taq FP」に化学的修飾を施しました。
PCRサイクルに入る前の95℃・5分間の熱処理によって、酵素の活性化処理を行います。

本品は、PCR初期に過剰な酵素活性を抑えたホットスタートPCRを行うことができるため、ミスプライミングや無為な酵素の失活を抑えることができます。
またPCRサイクルの進行に伴い、新たに活性が回復した酵素がPCR反応液中に供給されるため、高効率で特異的な核酸増幅を行うことができます。

本品にはPCRを行うために必要な基質dNTP混合液と、用途によって使い分けができる2種類の10倍濃度の反応バッファーが添付されます。

M.W.	68kDa
活性	2.5units/µl
単位の定義、形状、純度	Gene Taq 参照

・高い特異性と、高いDNA収量

・室温での反応液調製が可能

・5'-3'エキソヌクレアーゼ活性を有さない

・マルチプレックスPCRに最適

・宿主菌由来のDNAの混入を極力少なくした高い精製度

・条件に合わせて使い分けできる2種類のバッファーを添付
　 （10×Brilliant BufferはHot-Start Gene Taqに最適化させており、短鎖DNA（特に1.5 kb以下）の増幅において有効な反応バッファーである）

＊容量	構成品名	50units包装	250units包装
	Hot-Start Gene Taq (2.5U/μL)	20µl	100µl
	10×Gene Taq Universal Buffer（15mmol/L Mg2+）	1.0ml	1.0ml
	10×Brilliant Buffer（20mmol/L Mg2+）	0.2ml	1.0ml
	dNTP Mixture （2.5mmol/L each）	0.16ml	0.8ml

＊-20℃保存（凍結不可）

【使用例 1】 Plasmid DNAを鋳型として9対のプライマーにてマルチプレックスPCRを行なった。製品に添付されている2種類の反応バッファーで比較した。

■PCR反応液組成 鋳型DNA 2.5µL Primer Mixture 1µL Reaction Buffer 1× dNTP Mixture 0.2mM Polymerase 0.3U TOTAL 50µL

■サーマルサイクラー条件 （ABI2720） 95℃ 30sec. 10Cycles 65℃ 1min. 72℃ 1min. 95℃ 30sec. 27Cycles 60℃ 1min. 72℃ 1min. 72℃ 　7min.

■結果	Lane M OneSTEP Marker 11 (pUC19/Msp I digest) Lane 1. Hot-Start Gene Taq 　Brilliant buffer Lane 2. Hot-Start Gene Taq 　Universal buffer Lane 3. N社 改変型 DNA polymerase

【使用例 2】 HeLa DNA (50ng)を鋳型として、下記3種類の増幅困難なプライマーに対してシャトルPCRを行なった。

■プライマー (鎖長： 500bp) A-1 F 5'-AGTGGGCAGAGCCAGTCACT-3' R 5'-AGACTGGATGCCCAGCCTAA-3' A-2 F 5'-CAGACTCTGGGGCTGCCCAT-3' R 5'-TCAAACACTGGCTTGGGGTA-3' A-3 F 5'-CCTTGGAGCAATGAGCAATG-3' R 5'-CATCTTTCCAGGCTCCTTCC-3'

■PCR反応液組成 鋳型DNA 50ng Primer (10 μ M each) 1µL 10×Reaction Buffer 5µL dNTP Mixture 0.2mM Polymerase 0.25U TOTAL 50µL

■サーマルサイクラー条件 　 （ABI2720） 95℃ 5min. 95℃ 30sec. 30Cycles 68℃ 1.5min. 68℃ 3min. 4℃

■結果

Hot-Start Gene Taq で Brilliant Bufferを使用すると、特異性の低いプライマーからでも特異性の高い増幅ができ、目的の増幅産物が高収量得られた。

製品名	特長	分子量	5'→3' エキソヌクレアーゼ活性	ターミナルトランス フェラーゼ活性
Gene Taq	特に1kbp以下のDNAフラグメントの増幅効率が高い。	68 kDa	－	＋
Gene Taq NT	天然型Taq DNA ポリメラーゼと同じ機能を有する。通常のPCRに使用できる。	94 kDa	＋	＋
Gene Taq FP	Gene Taqをさらに高純度に精製し、宿主菌由来のDNAの混入を極力抑えたTaq DNA ポリメラーゼである。ゲノムDNAのコンタミに大きく影響を受けるRAPD PCRなどに適している。	68 kDa	－	＋

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