Reverse Transcription Assistant Reagent
| Code No. | 製品名 | 包装単位 | 希望納入価格 |
|---|---|---|---|
| 315-05941 | RTmate | 500 µl |
16,000円 |
| 311-05943 | 25 µl |
2,000円 |
RTmateは、T7 RNA Polymeraseで合成した976ヌクレオチドからなるRNAの溶液で、RT反応(1 Step RT-PCRを含む)の反応液に直接添加して使用します。
効果1 : RT-PCR検出限界感度が上昇します
効果2 : RT-PCRの最終増幅産物が増加します
効果3 : RNA量が微量でも効率よくcDNAが合成可能
効果4 : QuantitativePCRでは精度の高いRNA希釈系列検量線が作成可能
こちらをご覧ください。 → [seq.txt]
本品を10×濃度品としてRT反応または1step RT-PCRの反応系に添加。終濃度5ng/µlでの使用となります
例)RT反応への添加
10×Reaction Buffer 25mM MgCl2 2.5mM dNTP 50µM Oligo(dT) 20U/µl RNase Inhibitor 50U/µl Reverse Transcriptase Total RNA RTmate H2O Total
実験例1
ISOGENで抽出したマウス(C57BL/6)肝臓Total RNA中のInsulin-like growth factor-I(IGF-I)を2 step Quantitative RT-PCRで検出した。
first stepのRT反応にRTmateを添加し、second stepのQuantitative PCRにおける増幅曲線、検量線を、対照実験のデータと比較することで、RTmateの効果を確認した。
図1 Quantitativeにおける増幅曲線 : RTmateなし(対照実験)
図2 Quantitativeにおける増幅曲線 : RTmate添加
図3 検量線の比較
結果 RT反応へのRTmateの添加によってQuantitative PCRでの増幅効率が良く(Ct値が低く)なり、直線性の高い検量線が得られた。 実験例2
実験例1と同様のRNAについて、IGF-I mRNAのRT-PCR最終増幅産物のアガロースゲル電気泳動を行った。 1 : 鋳型RNA量 0 pg
2 : 鋳型RNA量 1 pg
3 : 鋳型RNA量 10 pg
4 : 鋳型RNA量 100 pg
5 : 鋳型RNA量 1000 pg
結果 RTmateの添加によって、低鋳型量におけるRT-PCR増幅産物量の増加と、それによる感度上昇が確認された。
RTmate リーフレット[No, 149] (こちらからPDFファイルをダウンロードできます。474KB）
・ISOGEN
・ISOGEN-LS
・ISOGEN/ISOGEN-LS Poly(A)+ Isolation Pack
