Control siRNA duplexシリーズ

Control siRNA duplex シリーズ

コードNo.	品名	容量	希望納入価格
319-05841	Control siRNA duplex, Human β-actin	5 nmol	20,000円
316-05851	Control siRNA duplex, Human NuMA	5 nmol	20,000円
313-05861	Control siRNA duplex, Human cdk1	5 nmol	20,000円
310-05871	Control siRNA duplex, Human Eg-5	5 nmol	20,000円
317-05881	Control siRNA duplex, Human Lamin A/C	5 nmol	20,000円
314-05891	Control siRNA duplex, Human Lamin B1	5 nmol	20,000円
317-05901	Control siRNA duplex, Human Vimentin	5 nmol	20,000円
314-05911	Control siRNA duplex, Jellyfish GFP	5 nmol	20,000円
311-05921	Control siRNA duplex, Firefly Luciferase GL2	5 nmol	20,000円
318-05931	Control siRNA duplex, Firefly Luciferase GL3	5 nmol	20,000円

Control siRNA duplexシリーズは、文献(1)(2)(3)にてRNAi(RNA interference)効果が報告されている配列を採用した二本鎖siRNAで、RNAi実験を行う際の陽性コントロールsiRNAとして使用できます。
5nmolのsiRNAが凍結乾燥されています。
24ウェル培養細胞に対して60pmolの導入実験(3)を行った場合、約80回分に相当します。

・約80回分（24ウェル培養の細胞に対して60 pmolの導入実験を行った場合）
・形状：凍結乾燥品

・RNaseフリーのBufferで溶解し、凍結融解はできるだけ避けて下さい。
・溶解後は小分け分注し、－ 20℃で保存して下さい。
・RNase のコンタミには十分注意して下さい。

・ 250µlのRNaseフリーBufferで溶解すると、20µmol/l溶液になります。
　250µl のH₂O（RNase フリー）で溶解した場合にはアニーリングバッファーの組成になりますので、必要に応じて脱塩操作を行って下さい。

Annealing Buffer 組成： 50mmol/l Tris-HCl（pH 7.5）， 100mmol/l NaCl

・本品はニッポンイージーティーまたはEUROGENTEC社で合成されたsiRNAをニッポンジーンで製品化したものです。

実験例 1

　1×105個のHeLa細胞に対して、0.10µgのGFP発現ベクター(pEGFP-N1)と20pmoleのControl siRNA duplex, Jellyfish GFPをリポフェクション試薬にて同時導入し、3日間培養した後、蛍光顕微鏡で観察した(実験1)。また、同時に各種対照実験も行った(実験2〜5)。

実験1 : pEGFP-N1とControl siRNA duplex, Jellyfish GFP(二本鎖)を同時導入

実験2 : pEGFP-N1のみを導入

実験3 : pEGFP-N1とControl siRNA duplex, Jellyfish GFPのantisense鎖(一本鎖)を同時導入

実験4 : pEGFP-N1とControl siRNA duplex, Jellyfish GFPのsense鎖(一本鎖)を同時導入

実験5 : pEGFP-N1とControl siRNA duplex, Firefly Luciferase GL3(二本鎖)を同時導入

実験1

実験2

実験3

実験4

実験5

＜結果＞
実験1ではGFP蛍光が観察されなかった。それに対して、実験2〜4の対照実験では、全て蛍光が観察された。これにより、RNAiに対する二本鎖siRNAの有効性が確認された。また、実験5でGFP蛍光が観察されたことから、RNAiには遺伝子特異的なsiRNAが必要である事が確認された。

実験例 2

1×105個のNIH3T3、COS-1細胞に対して、pGL3-control(1µg)、pRL(0.1µg)、"Control siRNA duplex, Firefly Luciferase GL3"(final 25 nmol/l, 2.5nmol/l, 0.25 nmol/l)をリポフェクション法を用いて同時導入し、24時間後にLuciferase活性を測定してRNAi効果を確認した。

NIH3T3(Mouse)

COS-1(Monkey)

1 : Control (H2O)

2 : siRNA (25 nmol/l)

3 : siRNA (2.5 nmol/l)

4 : siRNA (0.25 nmol/l)

実験例 3

1×105個のHeLa細胞に対して、pGL3-control(1µg)、pRL-TK(0.1µg)、"Control siRNA duplex, Firefly Luciferase GL3"(final 25 nmol/l)、"Control siRNA sense"(final 25 nmol/l)、"Control siRNA antisense"(final 25 nmol/l)、"Control siRNA duplex, Jellyfish GFP"(final 25 nmol/l)をリポフェクション法を用いて同時導入し、24時間後にLuciferase活性を測定してRNAi効果を確認した。

HeLa(Human)

1 : Control (H2O)

2 : siRNA sense (25 nmol/l)

3 : siRNA antisense (25 nmol/l)

4 : siRNA duplex (25 nmol/l)

5 : siRNA duplex GFP (25 nmol/l)

Harborth, J., Elbashir, SM., Bechert, K., Tuschl, T. and Weber, K.(2001). J. Cell. Sci. 114, 4557-65.
Caplen, NJ., Parrish, S., Imani, F., Fire, A. and Morgan, RA.(2001). Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 98, 9742-47.
Elbashir, SM., Harborth, J., Lendeckel, W., Yalcin, A., Weber, K. and Tuschl, T.(2001). Nature(London). 411, 494-8.

NIH3T3(Mouse)	COS-1(Monkey)
		1 : Control (H2O) 2 : siRNA (25 nmol/l) 3 : siRNA (2.5 nmol/l) 4 : siRNA (0.25 nmol/l)

HeLa(Human)
	1 : Control (H2O) 2 : siRNA sense (25 nmol/l) 3 : siRNA antisense (25 nmol/l) 4 : siRNA duplex (25 nmol/l) 5 : siRNA duplex GFP (25 nmol/l)