ISOGENを用いて下記のプロトコルでRat脊椎からのtotal RNA抽出を試み、得られたtotal RNAの収量と純度を測定しました。
Ratから脊椎を摘出し、付着している筋肉を、手早く、できるだけ除去した(注1)
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脊椎を液体窒素中で磨砕
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粉末状組織 0.5 g
↓←ISOGEN 5 ml
ポリトロンでホモジナイズ
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静置(室温、5分)(注2)
↓←クロロホルム 2 ml
強く混合(2分)
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静置(室温、3分)
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遠心分離(5,000 rpm、4°C、15分)
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上清を各サンプル 2.5 mlずつ回収
↓←イソプロパノール 2.5 ml(注3)
静置(室温、10分)
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遠心分離(5,000 rpm、4°C、10分)
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上清を除去
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75% エタノールで洗浄(2回)
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ddH2Oに溶解
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エタノール沈澱
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75% エタノールで洗浄(2回)
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ddH2O 300µlに溶解
OD260 OD280 OD260/280 収量(µg) 0.3878 0.1744 2.2241 466 吸光度測定方法
RNA溶液 1 µlを50mM Tris-HCl (pH8.0) 99 µlで希釈し、吸光度を測定