ISOHAIR実験例　　MCT118型検査

MCT118座位は、第1染色体短腕部末端に位置する16塩基を繰り返し単位とするVNTR(variable number of tandem repeat)であり、個人によって繰り返し数が異なります。これを利用して、法医学資料からの個人識別などに用いられています。

≪実験例1≫

ISOHAIRを用いて、A、B、C 3人の毛根部6cmよりDNAを抽出し、得られたDNAの1/4量を使用して、MCT118座位をPCRにて増幅し、電気泳動を行いました。

Material and Method

• 鋳型 : ISOHAIRを用いてヒト毛髪より抽出したDNA
  
• プライマー配列
  
  • Forward : 5'-GAAACTGGCCTCCAAACACTGCCCGCCG-3'
  • Reverse : 5'-GTCTTGTTGGAGATGCACGTGCCCCTTGC-3'
    
• PCR用試薬
  
  • Gene Taq NT
  • 10×Gene Taq Universal Buffer
  • dNTP Mixture(2.5mM each)
  • d.d.H2O

  PCR反応液 鋳型 5 µl 10×Gene Taq Universal Buffer 5 µl dNTP 4 µl プライマー(Forward, 20pmol/µl) 1 µl プライマー(Reverse, 20pmol/µl) 1 µl d.d.H2O 33.5 µl Gene Taq NT 0.5 µl Total 50 µl

  PCR条件 94°C 1 min. 94°C 30 sec. 30 cycles 64°C 30 sec. 72°C 2 min. 72°C 5 min.

結果

M : Marker 5(φX174/Hinc II digest) 1 : 試料A 2 : 試料B 3 : 試料C Agarose 21, 3% gelで電気泳動

≪実験例2≫

IISOHAIRを用いて、父、母、子1、子2、他人の各々の毛根部1cm×2本よりDNAを抽出し、得られたDNAの1/4量を使用して、MCT118座位をPCRにて増幅し、電気泳動を行いました。

Material and Method

• 鋳型 : ISOHAIRを用いてヒト毛髪より抽出したDNA
• プライマー配列 : 実験例1と同じ
  
• PCR用試薬 : 実験例1と同じ
• PCR反応液組成 : 実験例1と同じ

PCR条件

94°C	1 min.
94°C	15 sec.	30 cycles
66°C	15 sec.
72°C	2 min.
72°C	5 min.

Result

M : Marker 5(φX174/Hinc II digest) 1 : 父 2 : 母 3 : 子1 4 : 子2 5 : 他人 Agarose 21, 3% gelで電気泳動

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