Ethachinmate

アルコール沈殿用共沈剤（DNase，RNaseフリー）

酵素反応に及ぼす影響

Data 1. 制限酵素とT4 DNA Ligase

Ethachinmateの存在下で、λDNAを制限酵素とT4 DNA Ligaseを用いて切断-連結-再切断した。反応液は10 µlあたり1 µlのEthachinmateを含み、各酵素の反応条件は本誌記載の酵素反応条件に従った。

Ethachinmate	－	＋	－	＋
制限酵素	Hae III		Hind III		Lane 1 : 制限酵素による切断 Lane 2 : T4 DNA Ligase による連結 Lane 3 : 制限酵素による再切断
結果

結果

制限酵素とT4 DNA Ligaseの反応は、Ethachinmate存在下でも影響を受けないことがわかった。

Data 2. 逆転写酵素

Ethachinmateの存在下で、AMV Reverse Transcriptase(RTase)を用いて、鋳型poly(rA)・(dT)_12-8へ[³H]dTMPを取り込ませた。
反応は50 µl [50 mmol/l Tris-HCl(pH8.3), 6 mmol/l MgCl2, 40 mmol/l KCl, 0.5 mmol/l [³H]dTTP, 0.4 mmol/l poly(rA)・(dT)_12-8, 5 units AMV RTase]、42°Cで行った。

RTase	Ethachinmate

−	10 µl
＋	0 µl
＋	5 µl
＋	10 µl

結果

AMV Reverse Transcriptaseによる合成反応は、Ethachinmate存在下でも影響を受けないことがわかった。

Data 3. Taq DNA Polymerase

Ethachinmateの存在下で、約600 bpのDNA領域をTaq DNA Polymeraseを用いて増幅した。
反応は、25 µl [TAPS-HCl, pH9.3, 50 mmol/l KCl, 2 mmol/l MgCl2, 1 mmol/l 2-メルカプトエタノール, 0.01% ゼラチン, 200 µmol/l dNTPs, 0.2M プライマー, 1.25 units Taq DNA Polymerase] で、94°C 1分間、55°C 2分間、72°C 1分間を25サイクル行った。

Lane 1 : Ethachinmate 0 µl
Lane 2 : Ethachinmate 0.2 µl
Lane 3 : Ethachinmate 0.5 µl
Lane 4 : Ethachinmate 1 µl
Lane 5 : Ethachinmate 3 µl
Lane 6 : Ethachinmate 5 µl