Cascade-crRNA complex, hB2M

Cas3 プロテイン NLS
CRISPR-Cas3ゲノム編集
品名 Code No. 包装単位 価格 備考
Cascade-crRNA complex, hB2M 312-09471 250 µg 98,000円  
 

製造元　（株）ニッポンジーン

表示価格は希望納入価格 (税別) です。

製品説明

本品は、CRISPR-Cas3ゲノム編集用のCascadeタンパク質とCRISPR RNA (crRNA)の複合体で、複数の核移行シグナル(NLS)が付与されています。crRNAはヒトのbeta-2-microglobulin(B2M)遺伝子を標的としています。Cas3 protein NLSと組み合わせると、標的配列を含むDNAを切断することができます。

本品は特定の実験系において、ヒトB2M遺伝子に対してゲノム編集効果が確認されています。CRISPR-Cas3システムの実験系を新しく立ち上げる際に、本品とCas3 protein NLS を組み合わせて予備実験に使用することができます。

特長

● CRISPR-Cas3システムの実験系立ち上げの際の予備実験に使用可能
● ヒト beta-2-microglobulin（B2M）遺伝子を標的としたCascade-crRNA複合体
● 本品とCas3 protein NLSを組み合わせることで標的配列を含むDNAを切断することが可能
● 核移行シグナル（NLS）を付与

▲このページのトップへ

製品内容

Cascade-crRNA complex, hB2M
構成品 容量 保存 備考
Cascade-crRNA complex, hB2M 250 µg x 1本 -80°C 起源：遺伝子組換え大腸菌
分子量：396,819　(アミノ酸配列より算出)
濃度：25 µg/µL Cascade-crRNA complex, hB2M
形状：20 mM HEPES-NaOH (pH 7.0), 350 mM NaCl

▲このページのトップへ

使用例

使用例1　細胞でのゲノム編集評価 （データ提供：C4U株式会社）　


Flow CytometoryによるB2M遺伝子のノックアウト（KO）率
Cas3 ‒ Cascade-crRNA複合体を導入した試験区では平均して
18.1%の細胞にB2M遺伝子が発現していないことを確認した。(n=3)

β2-ミクログロブリンをコードするB2M遺伝子をターゲットとして実験を行った。エレクトロポレーション法でHEK293T細胞へCas3 protein NLS（Code No.311-09441）及びCascade-crRNA complex, hB2M（Code No.312-09471） を導入し、培養3日後にFlow CytometoryでB2M遺伝子のノックアウトをHLA-A抗体を使って確認した。また、B2M遺伝子がどの程度欠損が起きているかをクローニング及びシーケンス解析により確認した。

＜実験方法＞
1.　RNP（Cas3 ‒ Cascade-crRNA複合体） 各種を調製
2.　細胞懸濁液を用意（0.3 x 106 cells/well）
3.　エレクトロポレーション（下記：実験条件）
4.　エレクトロポレーション後、3 日目にFlow CytometoryでB2M遺伝子の発現を測定
5.　KO率を計算

＜実験条件＞
【エレクトロポレーター】 4D-Nucleofector® (Lonza社)
【Pulse Code】DG150
【細胞】HEK293T細胞, 0.3 x 106 cells/well
【RNP】100 pmol each/well (6 well plate)


シーケンス解析による欠損領域の確認
B2M遺伝子がどの程度欠損が起きているか、TAクローニングおよびシーケンス解析により確認した。

▲このページのトップへ

使用例2　in vitro での基質DNAの切断確認

Cas3 protein NLS および Cascade-crRNA複合体を用いて、PAMと標的配列を含むPlasmid DNAの切断確認を行った。

＜反応系＞
5 mM HEPES-KOH (pH 7.5),
60 mM KCl,
10 mM MgCl2,
10 µM CoCl2
2.5 mM ATP,
0.24 µM Cas3 protein NLS,
0.20 µM Cascade-crRNA複合体,
100 ng Plasmid DNA

＜反応条件＞
37°C、5分間反応
↓
SDS含有のLoading Buffer(Code No. 313-90111)を添加し、
アガロースゲル電気泳動
1% Agarose S
M : Gene Ladder Fast 2

[参考文献]　Yoshimi, K. et al.:Nature Communications, 13:4917 （2022）

結果　PAMおよび標的配列を含むPlasmid DNA（レーン１）において切断を確認した。一方、非標的配列を含むPlasmid DNA（レーン3）において切断は確認されなかった。

▲このページのトップへ

資料 Data Sheet

製品マニュアル

SDS(Safety Data Sheet)

リーフレット

▲このページのトップへ

関連情報

ライセンス

備考

関連製品

問い合わせ先

購入に関するお問い合わせ先
富士フイルム和光純薬株式会社および同社代理店・特約店
富士フイルム和光純薬株式会社　製品検索サイト
製品に関するお問い合わせ先
株式会社ニッポンジーン　学術営業課

ページトップ