Control RNA, SARS-CoV-2 (N gene)

陽性コントロールRNA

品名	Code No.	包装単位	価格	備考
Control RNA, SARS-CoV-2 (N gene)	318-09331	150 μL	20,000円

製造元　（株）ニッポンジーン

表示価格は希望納入価格 (税別) です。

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製品説明

本品は、新型コロナウイルス（SARS-CoV-2）のNucleocapsid Protein遺伝子（N遺伝子）の全長配列を含む合成RNAで、N遺伝子を標的配列とする検出系の陽性コントロールRNAとして使用できます。
また、配列内部にHindIIIサイトが挿入されているため、実験室内でコンタミネーションが発生した場合に、増幅産物が本品由来か、他の鋳型由来かを判別することができます。

特長

・N遺伝子検出系の陽性コントロールRNAとして使用可能・陽性コントロールRNAから増幅したPCR産物は制限酵素処理で判別可能

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製品内容

Control RNA, SARS-CoV-2 (N gene)
構成品	容量	保存	備考
Control RNA, SARS-CoV-2 (N gene)　 (40,000 copies/µL)	150 μL x 1	-80°C	陽性コントロール 40,000 copies/μL 陽性コントロールRNAの溶媒組成は、水で10倍希釈したRTmate (5 ng/µL RNA溶液)です。
Water, Nuclease free	1 mL x 1	-80°C	陰性コントロール陰性コントロール（No Template Control）として使用してください。

※ 本品に陽性コントロールRNAの希釈溶媒（1/10濃度RTmateやヌクレアーゼフリー水など）は添付されておりません。別途ご用意ください。

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使用例

実験例 1: N遺伝子検出系の陽性コントロール実験

国立感染症研究所（NIID）の「病原体検出マニュアル2019-nCoV Ver.2.9.1」に記載されている検出系の N2セットを使用し、リアルタイムOne-Step RT-PCR法を実施した。
陽性コントロール（本品）の40,000 copies/μLから4 copies/μLまでの5段階希釈系列を添加した。また、陰性コントロールとして Water, Nuclease free を添加した。

結果

4 ～ 40,000 copies/μL の範囲でR2値0.99以上の直線性のある検量線が得られた。

実験例 2: PCR 産物の制限酵素処理

鋳型として下記のとおり調製した陽性コントロールRNA (本品) とウイルスRNAを用いて、NIIDのN2セット検出系でRT-PCRを実施した。
得られたPCR産物 20 μLに、200 unitsのHindIII (high conc.) （Code No. 311-01761）を添加して37℃で30分間反応させた後、アガロースゲル電気泳動に供した。

陽性コントロールRNA： 100倍希釈した陽性コントロールRNA (本品) 400 copies/μL
ウイルスRNA（SARS-CoV-2 RNA）：熱不活化コロナウイルスを1000倍希釈した溶液からRNA抽出キット ISOSPIN Viral RNA (Code No. 310-08931) を用いて抽出したRNA

結果

本品を鋳型にした増幅産物は HindIIIによる切断が見られ、ウイルスRNAを鋳型にした増幅産物では切断は見られなかった。
どちらを鋳型にした増幅産物かは、制限酵素処理で判別できた。

Q & A

Control RNA, SARS-CoV-2 (N gene)を鋳型に増幅できる検出系について: 国立感染症研究所（NIID）の「病原体検出マニュアル2019-nCoV Ver.2.9.1」に記載されているNセットおよびN2セットの検出系で、本品を陽性コントロールRNAとして使用できます。また、NIIDのNセットおよびN2セットを用いた場合の増幅産物のみ、制限酵素処理で確認できます。
（注意）アメリカ疾病予防管理センター（CDC）などの検出系を使用した場合、増幅産物をHindIIIで切断することはできません。

・　NIID N1 (128 bp)[N_Sarbeco_F1, N_Sarbeco_R1, N_Sarbeco_P1]
・　NIID N2 (158 bp)[NIID_2019-nCOV_N_F2, NIID_2019-nCOV_N_R2, NIID_2019-nCOV_N_P2]

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資料 Data Sheet

本品に使用している塩基配列

Control RNA, SARS-CoV-2 (N gene) 配列情報　（Text）
・本品は、SARS-CoV-2のN遺伝子の全長を含みます（Accession Number: NC_045512 Region: 28274..29533）。
・本品は国立感染症研究所「病原体検出マニュアル　2019-nCoV Ver.2.9.1」に記載されている検出系（NセットおよびN2セット）の増幅領域にHindIII認識配列が挿入されるよう、一部配列が改変されております。