qPCR Mastermix シリーズ

リアルタイムPCR用試薬（蛍光標識プローブ検出系）

品名	Code No.	包装単位	価格	備考（Eurogentec Code）
qPCR Mastermix	314-80011	300反応用	65,000円	RT-QP2X-03
qPCR Mastermix Plus	312-80291	300反応用	65,000円	RT-QP2X-03-075+
qPCR Mastermix Plus Low ROX	312-80431	300反応用	65,000円	RT-QP2X-03+WOULR

製造元　Eurogentec S.A.

表示価格は希望納入価格 (税別) です。

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製品説明

Eurogentec社製品のqPCR Mastermix シリーズは、リアルタイムPCR 用サーマルサイクラー（プレートタイプ）に対応した蛍光標識プローブ検出系のリアルタイムPCR用マスターミックス（2 x 濃度）です。
化学的な修飾を施されたホットスタートPCR用の耐熱性ポリメラーゼ「HOTGoldstar^™ DNA Polymerase」を採用しており、高い特異性と高感度のPCRを実現します。マスターミックスにはdUTPが含まれているため、Uracil-N-Glycosylaseによるキャリーオーバー防止処理可能です。

特長

・高い特異性と高感度のPCRを実現 ・蛍光標識プローブ検出系に最適化 ・qPCR Mastermixは、操作性に優れたプレミックスタイプの試薬の小分け分注タイプ ・qPCR Mastermix Plusは、プレミックスタイプの試薬の１ボトルタイプ

注意事項

本品は、化学修飾を施したホットスタートPCR酵素を採用しているため、酵素の活性化ステップ（95°C 10分）をPCR条件通り行わないと十分な酵素活性が得られず増幅効率が低下します。
本品は、リアルタイムPCR用サーマルサイクラーでのランモード「Fast」の標準プロトコル（95°C 20秒→（95°C 3秒→60°C 30秒） x サイクル）には対応しておりません。

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製品内容

使用回数

包装単位は50 µl 反応系での使用回数です。

保存方法

－20°C（遮光）
長期保存する場合は－20°C（遮光）で保存して下さい。2年間安定です。 4°C保存の場合は約1ヶ月間の保存が可能です。

・qPCR Mastermix
構成品	容量	形状
2 x Reaction Buffer	1.5ml x 5	HOT Goldstar^™ DNA Polymerase, ROX Passive reference, Mg²⁺（5mM final conc.）, Uracil-N-Glycosylase, dNTP Mixture(including dUTP), stabilizers
50mM MgCl2	1.5ml x 1	50mM MgCl2 solution
対象機種： ABI GeneAmp^® 5700, ABI Prism^® 7000/7700/7900, ABI7300, StepOne^™/StepOnePlus^™, MasterCycler^® ep realplex

・qPCR Mastermix Plus
構成品	容量	形状
2 x Reaction Buffer	7.5ml x 1	HOT Goldstar^™ DNA Polymerase, ROX Passive reference, Mg²⁺（5mM final conc.）, Uracil-N-Glycosylase, dNTP Mixture(including dUTP), stabilizers
50mM MgCl2	1.5ml x 1	50mM MgCl2 solution
対象機種： ABI GeneAmp^® 5700, ABI Prism^® 7000/7700/7900, ABI7300, StepOne^™/StepOnePlus^™, MasterCycler^® ep realplex

・qPCR Mastermix Plus Low ROX
構成品	容量	形状
2 x Reaction Buffer	7.5ml x 1	HOT Goldstar^™ DNA Polymerase, ROX Passive reference（low conc.）, Mg²⁺（5mM final conc.）, Uracil-N-Glycosylase, dNTP Mixture(including dUTP), stabilizers
50mM MgCl2	1.5ml x 1	50mM MgCl2 solution
対象機種： ABI Prism^® 7500, Mx3000P/3005/4000

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実験例

実験例1　ダイズ内在性遺伝子レクチン（Le1）の検出

ダイズ内在性DNA Le1オリゴヌクレオチドセットを用い、GMダイズ（RRS）陽性コントロールプラスミドDNAから増幅されたダイズ内在性遺伝子レクチン(Le1)を検出した。

	Template：	GMダイズ（RRS）プラスミドセット（NTC, 20, 125, 1,500, 20,000, 250,000copies）
	Probe：	Le1-Taq（FAM/TAMRA）
	定量PCR 試薬：	qPCR Mastermix
	比較対象：	A社製品
	PCR volume：	25μl
	装置：	ABI GeneAmp^® 5700
	PCR condition：	95°C 10分→（95°C 30秒→59°C 60秒） x 40サイクル

結果

・増幅曲線比較（左から qPCR Mastermix、A社製品）

・検量線の比較（Threshold値：0.095）

上記の結果より、Eurogentec社 qPCR Mastermix はA社製品とほぼ同等の増幅であると思われる。

実験例2　トウモロコシ内在性遺伝子スターチシンターゼIIb（SSIIb）の検出

	Template：	GMトウモロコシプラスミドセット（NTC, 20, 125, 1,500, 20,000, 250,000copies）
	Probe：	SSⅡb-Taq（FAM/TAMRA）
	定量PCR 試薬：	qPCR Mastermix
	比較対象：	A社製品
	PCR volume：	25μl
	装置：	ABI GeneAmp® 5700
	PCR condition：	95°C 10分→（95°C 30秒→59°C 60秒） x 40サイクル