Thermostable β-Agarase

【耐熱性】 アガロースゲルを分解する酵素

Thermostable β -Agaraseは、(独)海洋研究開発機構が深海底泥から発見した耐熱性微生物由来のアガラーゼであり、極めて耐熱性に優れている特長を持っています。 アガラーゼは、アガロースゲルをneoagaro-oligosaccharideに分解する酵素です。 例えば、低融点タイプのアガロースゲルで電気泳動したDNAのゲルブロックを再融解後、β-Agaraseで分解すると、その溶液は再びゲル化しなくなります。従って、大きなDNA断片でも比較的傷つけることなく、容易に回収することが可能です。また、従来のβ-Agaraseと比較して耐熱性に優れているため、簡便・短時間にアガロースゲルから DNA を抽出することが出来ます。

形状： 50mmol/l NaCl, 20mmol/l Tris-HCl(pH7.5)

単位の定義： 1unit は、60℃で１分間当たり1µmolのD-ガラクトースに相当する量の還元糖をアガロースゲルから生成する酵素活性とする。

本酵素は独立行政法人海洋研究開発機構 海洋・極限環境生物圏領域における研究により、有人潜水調査船「しんかい 6500 」を用いて深海から採取された耐熱性微生物に由来しています。
詳しくは、シーエムシー出版 『酵素開発・利用の最新技術』 第 5 章 深海微生物からの有用酵素の探索 p41-52（著者；秦田勇二、大田ゆかり、 日高祐子、能木裕一）をご参照下さい。
提供：(独)海洋研究開発機構

● 冷蔵保存が可能。

● アガロースゲル融解液に酵素を添加するだけの簡単操作。

● 至適温度が50～60℃なので、スタンダードタイプのアガロースにも使用可能。

● 最短10 分で反応可能。

● スケールアップが可能。

● アルコール沈殿による精製の必要がなく、ゲル分解後のDNA 溶液をそのままクローニングや制限酵素反応などの基質として使用可能。

● 温和な反応条件のため、せん断の少ないDNA の回収が可能。

基本プロトコール：アガロースゲルブロック（200mg）からのDNA 抽出

切り出したアガロースゲルブロック200mg（～200µl）をチューブに入れる

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5～10分間加熱し、アガロースゲルを完全に融解する（＊１）

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アガロースゲルが融解したことを確認し、50～65℃の恒温槽に移して（30～60秒ほど放置し）冷ます（＊２）

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6 units（6μl）のThermostable β-Agaraseを添加し、混和する

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50～65℃で5～10分間保温し、アガロースを分解する（＊３）

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氷上に静置し、再凝固しないことを確認する（＊４）（必要に応じてアルコール沈殿などの精製をする）

Fastプロトコール：低融点タイプアガロースゲルブロック（200mg）からのDNA 抽出

0.5～3％低融点タイプアガロース（ゲル融点65℃以下）/TAE/ゲルブロック200mg（～200μl）を1.5 ml 容チューブに入れる

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Thermostable β-Agarase 6units（6µl）を加える。（TBE バッファー使用の場合は、酵素添加前に65℃～70℃、10分間保温してゲルを融解する）

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65℃、10分間保温し、5分毎にタッピングして混和する

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氷上に静置し、再凝固しないことを確認する

*１．アガロースやバッファーの種類によって融点は異なる。（p.2:ニッポンジーンのアガロース）
*２．Thermostable β-Agarase は50～60℃で最大活性を示す。
*３．アガロースゲルブロックの量や容器の大きさ、Thermostable β-Agaraseの添加量によって反応時間が異なる。
*４．未分解のアガロースゲルが残っているとDNAの回収率が低下することがある。未分解ゲルが残っている場合は、再度プロトコールのはじめから反応を行う。

データ提供 （独）海洋研究開発機構

使用例 1： アガロースゲルブロックから回収した DNA 断片の PCR

使用例 2： アガロースゲルブロックから回収したDNA断片（500bp）のクローニング

使用例 3： アガロースゲルブロックから回収したDNA断片(100bp以下)のクローニング

使用例 4： 分子量の大きいDNA断片の低融点タイプアガロースゲルからの回収

使用例 5： アガロースゲルブロックから回収したDNA断片の塩基配列解析

参考資料： 「酵素添加量の検討」

●冷蔵（2～8℃）

・ 輸送時：冷凍（製品到着時の酵素溶液は凍結しておりますが、品質に問題ありません）
・ 4℃、-20℃で2年間保存（室温で１年間保存）してもアガロース分解活性に低下は見られない。
・110回まで、凍結融解によるアガロース分解活性の低下は見られない。

　Thermostable β-Agarase マニュアル (第4版)

　Thermostable β-Agarase リーフレット (No.188)

Thermostable β-Agarase MSDS

Code No.	製品名	包装単位	希望納入価格
316-02551	β-Agarase I	100 units	20,000円

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