ISOIL及びISOIL for Beads Beatingを用いた活性汚泥からのDNA抽出

活性汚泥等の液状のサンプルからDNAを抽出する場合、下記のようにプロトコルを若干変更することで、DNAの収量が増加します。

プロトコル

• ISOILの場合
  1. 活性汚泥0.5 mlをマイクロチューブに入れる。
  2. Lysis Solution HE 0.45 ml、Lysis Solution 20S 0.05 mlを添加し、転倒混和にて十分に撹拌した後、65°Cで1時間インキュベートする。
  3. 以下、ISOIL マニュアル標準プロトコル(3〜9)に同じ。
• ISOIL for Beads Beatingの場合
  1. 活性汚泥0.5 mlをBeads Tubeに入れる。
  2. Lysis Solution BB 0.45 ml、Lysis Solution 20S 0.05 mlを添加する。
  3. Beads Beat(4〜6 m/秒間または4,200 rpm〜6,800 rpmで30〜45秒間)し、65°で30分間インキュベート。
  4. 以下、ISOIL for Beads Beatingマニュアル 標準プロトコル(4〜10)に同じ。

結果

• M : OneStep Marker 1(λ/Hind III), 0.1 µg
• 1 : 活性汚泥1(MLSS 1500 mg/l), ISOILで抽出
• 2 : 活性汚泥1(MLSS 1500 mg/l), ISOIL for Beads Beatingで抽出
• 3 : 活性汚泥2(MLSS 5000 mg/l), ISOILで抽出
• 4 : 活性汚泥2(MLSS 5000 mg/l), ISOIL for Beads Beatingで抽出

活性汚泥0.5 mlから抽出したDNAの1/20量を1% Agarose Sで電気泳動。

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