Universal Quenching Probe

UQP（Universal Quenching Probe）法

品名	Code No.	包装単位	価格	備考
Universal Quenching Probe	-	1本	45,000円	鎖長：配列非公開修飾：3ʼ末端に蛍光色素、修飾ヌクレオチドを含む精製：HPLC 保証収量：5 nmol
Joint DNA	-	1本	9,000円	鎖長：標的DNAに相補的な配列は36 merまで設計可能修飾：なし精製：Cartridge 保証収量：2 O.D.

製造元　株式会社ニッポンジーン

表示価格は希望納入価格 (税別) です。

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サービス説明

　Quenchingプローブ (QP)は、「グアニン塩基による蛍光消光現象」に対応した緑色蛍光色素を標識したDNAオリゴです。

・ UQP-Joint DNA複合体が標識DNAに結合すると蛍光量の減少がリアルタイムPCR装置等の蛍光検出装置で検出されます。
・増幅終了後に温度を上昇させると（融解曲線解析の実施）、UQP-Joint DNA複合体が標的DNAから解離し、一旦消光していた蛍光色素が再発光するため、適切な増幅産物が得られたかどうか特異性を確認することができます。

　既定の配列で設計されたUniversal Quenching プローブ (UQP)と、UQPの相補的な配列が3’末端側に付加されたJoint DNAを組み合わせる方法は、標的遺伝子毎にQuenching プローブを合成する方法より簡単に「グアニン塩基による蛍光消光現象」を利用した標的遺伝子の検出や特異性の確認を始めることができます。
共通のUQPを1本と、標的用Joint DNAを用意するだけなので、標的毎に蛍光標識プローブを用意する方法より安価にたくさんの標的配列を探索することが可能となります。

特長

● 標的配列の探索が容易！　多様な標的配列に柔軟に対応
　　・蛍光標識されたUQPは共通
　　・Joint DNAの変更だけで新規ターゲットの追加が可能
● UQPを一般的なLAMP法やPCR法と併用することでバリアント解析が可能
　　・融解温度（Tm）解析により複数変異を識別可能

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サービス概要

UQPを用いた遺伝子バリアント解析（UQP法）

「1種類のJoint DNA」で複数バリアントを識別

　UQP法は、蛍光の消光現象を利用してDNAの融解温度（Tm）を測定し、そのTmの違いからSNPや変異を識別する方法です。

　Joint DNAの標的認識領域におけるミスマッチの数や位置によって、融解温度（Tm）は変化します。
そのため、同じUQP-Joint DNA系でも、融解温度解析で得られるピーク温度から、どのバリアントであるかを判定できます。
つまり、Joint DNAを変更するだけで、さまざまな標的配列の解析に柔軟に対応できます。

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事例紹介

LAMP-UQP法による灰色かび病菌SDHI剤耐性系統の検出

データ提供元：愛知県農業総合試験場環境基盤研究部生物工学研究室室長福田至朗先生

農業ほ場に発生する灰色かび病菌 (Botrytis cinerea) において殺菌剤耐性を有する系統の出現が問題となっている。
殺菌剤散布には薬剤抵抗性の発生状況モニタリングが不可欠となる。
⇒　SDHI剤が作用するコハク酸脱水素酵素遺伝子 (sdh遺伝子) の塩基置換を迅速、正確に検出する技術開発が必要

LAMP-UQP法によるSDHI剤耐性灰色かび病菌モニタリングの実施例

罹病植物を採取
単胞子分離しPDA培地で培養
菌糸を100 μL TEに懸濁
95℃で5分間インキュベート
1 μLを25 μL LAMP反応に使用
等温増幅蛍光測定装置 Genie^® Liteにセット
・ LAMP増幅　60°C・50分間
・ UQP融解温度解析　30→95°C（0.055°C/秒）

*sdh*遺伝子の変異
野生型	CAC	融解温度　57.9°C	SDHI剤感受性
H272R	CGC	融解温度　52.6°C	SDHI剤抵抗性
H272Y	TAC	融解温度　47.0°C
H272V	GTC	融解温度　40.8°C