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製品説明

CUGA^® in vitro Transcription Kit は、CUGA^® RNA ポリメラーゼを用いたin vitro 転写反応によるRNA 合成キットです。採用しているCUGA^® 3/CUGA^® 7 RNA ポリメラーゼおよびCUGA^® 6 RNA ポリメラーゼは、野生型T3/T7 RNA ポリメラーゼおよび野生型SP6 RNA ポリメラーゼよりも転写効率が高いため、大量のRNA 合成が必要なリボプローブの作製や、正確な鎖長のRNA 合成が必要なRNA 構造解析などの実験での使用に最適です。

特長

大量のRNA 合成が可能

プラスミドDNA やPCR 産物、化学合成オリゴヌクレオチド等、鋳型DNA の種類や鎖長を選ばずに大量（既存のキットと比較して、約2～5 倍量以上）のRNA を合成できます。CUGA^® ポリメラーゼおよびリボヌクレオチドを高濃度にて使用しているため、短鎖RNA（1,000 base 以下） の調製にも適しています。

安定に正確な転写反応を行うことが可能

CUGA^® ポリメラーゼが獲得した性質により、野生型ポリメラーゼを用いた既存のキットの欠点が克服され、in vitro 転写反応の効率が飛躍的に向上しました。また、野生型ポリメラーゼの強力なプロモーター配列認識能は変化しておりませんので、従来のプロモーター配列をそのまま使用できます。

目的とする RNA を安価に得ることが可能

CUGA^®ポリメラーゼを用いることにより、目的のRNA を正確かつ大量に合成できるため、in vitro 転写反応を用いたRNA 調製のコストパフォーマンスが大幅に改善されます。

幅広い研究分野への適用が可能

CUGA^®3/CUGA^®6/CUGA^®7 in vitro Transcription Kit を用いて得られたRNA は、下記のようなin vitro 転写反応を利用した既存の実験系にそのまま用いることができます。また、4 種類のリボヌクレオチドを個別に分注しているため、修飾ヌクレオチドあるいはキャップアナログ等の使用により、さらに多様な実験系を構築することが可能です。

• 無細胞タンパク質合成システムへの導入
• 高感度マイクロアレイ用プローブの調製
• 各種ハイブリダイゼーション用プローブの調製
• RNA 構造解析
• 機能性RNA (アプタマー、リボザイム、アンチセンス、siRNA、miRNA、等) の調製
• 微量mRNA の増幅
• SELEX 法

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製品内容

CUGA^® 3/7 in vitro Transcription Kit

構成品	5反応用	20反応用	保存	備考
CUGA® 3/7 Enzyme Solution	5 µl x 1	20 µl x 1	-20°C
5 x Transcription Buffer	20 µl x 1	80 µl x 1	-20°C
0.1 mol/l DTT	10 µl x 1	40 µl x 1	-20°C
100 mmol/l CTP	7.5 µl x 1	30 µl x 1	-20°C
100 mmol/l UTP	7.5 µl x 1	30 µl x 1	-20°C
100 mmol/l GTP	7.5 µl x 1	30 µl x 1	-20°C
100 mmol/l ATP	7.5 µl x 1	30 µl x 1	-20°C
Control DNA	4 µl x 1	6 µl x 1	-20°C
DNase Enzyme Solution	10 µl x 1	40 µl x 1	-20°C
10 mol/l Ammonium acetate	250 µl x 1	1 ml x 1	-20°C
Enzyme Dilution Buffer	50 µl x 1	200 µl x 1	-20°C

CUGA^® 6 in vitro Transcription Kit

構成品	5反応用	20反応用	保存	備考
CUGA® 6 Enzyme Solution	5 µl x 1	20 µl x 1	-20°C
5 x Transcription Buffer	20 µl x 1	80 µl x 1	-20°C
0.1 mol/l DTT	10 µl x 1	40 µl x 1	-20°C
100 mmol/l CTP	2.5 µl x 1	10 µl x 1	-20°C
100 mmol/l UTP	2.5 µl x 1	10 µl x 1	-20°C
100 mmol/l GTP	2.5 µl x 1	10 µl x 1	-20°C
100 mmol/l ATP	2.5 µl x 1	10 µl x 1	-20°C
Control DNA	4 µl x 1	6 µl x 1	-20°C
DNase Enzyme Solution	10 µl x 1	40 µl x 1	-20°C
10 mol/l Ammonium acetate	250 µl x 1	1 ml x 1	-20°C
Enzyme Dilution Buffer	50 µl x 1	200 µl x 1	-20°C

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使用例

CUGA^® 7 in vitro Transcription Kit の実験例

1. RNA合成量の比較
2. 鋳型の末端形状の影響
3. 鋳型配列中のターミネーター配列の影響
4. 正確で効率の良い標識の取り込み

CUGA^® 6 in vitro Transcription Kit の実験例

1. RNA合成量の比較
2. RNA合成鎖長の比較
3. 鋳型末端形状の違いによる影響の確認
4. 転写終結シグナルによる影響の確認

CUGA^® 3 in vitro Transcription Kit の実験例

1. RNA合成量の比較
2. RNA合成鎖長の比較

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Q & A

2本鎖DNAのどちらが鋳型になりますか。

in vitro 転写反応では、転写開始点から下流のアンチセンス鎖を鋳型 DNA としてRNA を合成します。なお、プロモーター配列部分は完全に二本鎖を形成する必要があります。

鋳型DNAや転写産物の精製に使用できるキットはありますか。

鋳型DNAの精製や、in vitro転写システムで合成したRNAは、以下のPCR産物精製キットで精製可能です。
ISOSPIN PCR Product

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資料 Data Sheet

製品マニュアル

• CUGA^® in vitro Transcription Kit 　ユーザーズマニュアル(PDF)
• CUGA^®7 in vitro Transcription Kit 　（Code No. 307-13531）に添付の簡易マニュアル(PDF)

SDS(Safety Data Sheet)

• CUGA^® 7 in vitro Transcription Kit 　安全データシート(PDF)
  CUGA^® 6 in vitro Transcription Kit 　安全データシート(PDF)
  CUGA^® 3 in vitro Transcription Kit 　安全データシート(PDF)

リーフレット

• CUGA^®3/6/7 in vitro Transcription Kit　パンフレット（PDF）

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関連情報

備考

• 本品は試験研究用試薬です。医薬品の用途には使用しないでください。

参考文献

• John F. Milligan and Olke C. Uhlenbeck. : Methods in Enzymology, 180, 51 （1989）
• Biao He et al. : J. Biol. Chem. 273, （30）18802 （1998）
• Sambrook, J. et al. “ : Molecular Cloning ”, A Laboratory Manual, 3rd ed. （2001）
  

関連製品

• Cloning Vector pTS1 DNA（T3、T7 プロモーター配列を持つクローニングベクター）

問い合わせ先

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