ISOSPIN Cell & Tissue RNA

動物細胞や組織からのRNA 抽出キット

品名	Code No.	包装単位	価格	備考
ISOSPIN Cell & Tissue RNA	314-08211	50回用	27,000円
ISOSPIN Cell & Tissue RNA	310-08213	200回用	97,200円	（50回用 x 4）

製造元　（株）ニッポンジーン

表示価格は希望納入価格 (税別) です。

製品説明
製品内容
使用例
Q & A
資料 Data Sheet
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製品説明

キット外観
ISOSPIN Cell & Tissue RNA (200回用)

ISOSPIN Cell & Tissue RNA（アイソスピンセルアンドティシューアールエヌエー）は、動物培養細胞や動物組織^*1からRNA を抽出・精製するためのキットです。本キットは、カオトロピックイオン存在下でRNA がシリカへ吸着する原理を応用しており、フェノールやクロロホルムを使用しません。使用するスピンカラムは、カラム容積を最大限確保しており、内封されたシリカメンブレンは、充分なRNA 吸着容量と高い溶出効率を確保しています。

本キットでは、夾雑物を遠心分離により除去する方法とシリカメンブレン上でのDNase I 処理を採用しており、約1 時間で高純度のRNA を抽出・精製できます。

*1 心臓、骨格筋組織、軟骨からのRNA抽出はProteinase Kを用いる改変プロトコールをお試し下さい。

特長

高純度RNA

遠心分離による夾雑物の除去とシリカメンブレン上でのDNase I 処理により高純度なRNA抽出が可能です。

RNA-Seqにも最適

RNA-Seqに使用可能な高品質なRNAを抽出できます。

フィルターによる前処理が不要

試料のホモジナイズやろ過を目的としたフィルター処理を必要としません。本キットは遠心分離により夾雑物を沈殿して除去します。

DNase I 添付

DNase I （RNase free）がキットに含まれているため、別途購入の必要はありません。

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製品内容

ISOSPIN Cell & Tissue RNA (50回用)
構成品	容量	保存	備考
PT Extraction Buffer（組織用）	30 ml x 1 本	室温
C Extraction Buffer（細胞用）	30 ml x 1 本	室温
PT Binding Buffer（組織・細胞用）	40 ml x 1 本	室温	エタノール含有
PT Wash1 Buffer	40 ml x 1 本	室温	エタノール含有
PT Wash2 Buffer	40 ml x 1 本	室温	エタノール含有
DNase I (RNase free)	2,000 units x 1 本	－20°C
10 x DNase I Buffer	1 ml x 1 本	－20°C
ddWater (RNase free)	1 ml x 8 本	室温	DNase I 溶液調製用・溶出用
Spin Column	50 本 x 1 袋	室温	上部パーツ：カラム、下部パーツ：Collection Tube

輸送方法

ニッポンジーンから直送する場合、室温品を入れたキット箱と－20°C品とドライアイスを入れたスチロールボックスを一つの段ボール箱にまとめて入れて常温で輸送しています。

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使用例

プロトコール

動物培養細胞の場合：最大 6 x 10⁶ cells までの動物培養細胞に 600 μl のC Extraction Buffer（細胞用）を加え、ピペッティングで細胞を溶解する。
動物組織の場合：最大 20 mg までの新鮮な動物組織または凍結組織を1.5 ml マイクロチューブに採取し、試料に600 μl のPT Extraction Buffer（組織用）を加え、直ちにペッスルですり潰す。
↓
30 秒間以上Vortex する。
↓
以下のとおり抽出プロトコールを進める。
protocol

Data 1　RNAの収量の目安と吸光スペクトル

＜RNAの収量の目安＞
HeLa 細胞	15 μg RNA/10⁶cells
Jurkat 細胞	10 μg RNA/10⁶cells
Vero 細胞	15 μg RNA/10⁶cells
マウス脳	1.0 μg RNA/mg tissue
マウス肝臓	3.5 μg RNA/mg tissue
マウス腎臓	3.0 μg RNA/mg tissue
マウス精巣	1.5 μg RNA/mg tissue

Data 2　培養細胞（HeLa）からのRNA抽出

RNA電気泳動図

1 x 10⁶ 個のHeLa細胞からRNA抽出を行い、その後吸光度測定と電気泳動を行った（n = 3）。

＜吸光度測定結果＞

260/280	260/230	µg/10⁶ cells
2.035±0.019	2.254±0.028	19.30± 4.69

＜電気泳動結果＞

Lane 1, 2, 3：各0.5 µg RNA
右端： Marker 6
1％ゲル Agarose S

Data 3　マウス肝臓からのRNA抽出（RNA品質の比較）

RNA電気泳動図

ISOSPIN Cell & Tissue RNA およびA社RNA抽出キットを用いて、マウス肝臓から各社プロトコールにしたがいRNAを抽出した。抽出したRNAについて、バイオアナライザ(Agilent Technologies社)を用いたRNA Integrity Number (RIN値) の測定、および、アガロースゲル電気泳動、吸光度測定からRNAの品質を比較した。

＜吸光度測定結果とRIN値＞

＜電気泳動結果＞

Lane ① : A社キットで抽出したRNA
Lane ② : ISOSPIN Cell & Tissue RNAで抽出したRNA
各1 μgずつ泳動 in 1% Agarose S

結果　ISOSPIN Cell & Tissue RNA を用いて高品質なRNAを抽出できていることが確認できた。

Data 4　マウス組織からのRNA抽出（他社比較）

ISOSPIN Cell & Tissue RNA とA社製品を用いて、各社プロトコールに従ってマウスの各組織からRNAを抽出した。抽出したRNAは、吸光度測定により収量と純度を比較した。

マウス組織からのRNA抽出

結果　本品を使用してマウス各組織から高純度なRNAを高収量で得られた。

Data 5　培養細胞からのRNA抽出（他社比較）

ISOSPIN Cell & Tissue RNA と他社製品を用いて、各社プロトコールに従ってHeLa細胞（1×10⁶ 個）からRNAを抽出した（n=3）。抽出したRNAは、吸光度測定およびゲル電気泳動により比較した。さらに、吸光度の定量結果を基にRNA量を揃えて電気泳動および、cDNA合成とリアルタイムPCRを行った。

培養細胞からのRNA抽出

リアルタイムPCR

結果　抽出したRNA量を揃えて電気泳動を行ったところ、本品は他社品よりも濃くバンドが見られた。また、リアルタイムqPCRの結果では、他社品よりも低いCt値を示しており、本品では、高品質なRNAを抽出できていることが確認できた。

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Q & A

RNA抽出用試薬 ISOGEN との使い分けは？: 以下のような違いがありますので、目的に合わせてご選択ください。

ISOGEN はフェノールなどRNaseの活性を阻害する成分を含むため、試料溶解液（ホモジネート）を途中で凍結保存できます。
ISOSPIN Cell & Tissue RNA ではプロトコールの途中で保存することはできませんが、フェノールやクロロホルムなどの毒性有機溶媒を使用しません。
ISOGEN は液層分離のあとアルコール沈殿でRNAを回収するプロトコールのため、スケールアップを簡単に行うことができます。
ISOSPIN Cell & Tissue RNA ではスピンカラムを用いたプロトコールですので、操作が簡単で、多検体処理にも最適です。

RNA later®(RNA安定化試薬)で保存していた試料からも、本キットを用いてRNA抽出可能ですか？: はい、抽出可能です。
少ない細胞数からRNA抽出できますか？: 1 x 10⁴個のHeLa細胞から抽出した実績がございます。
原理上はこれより少ない細胞数からでも抽出可能と考えられます。スタートの細胞数が少ない場合は、溶出液量を減らすことでRNAの濃縮が可能です。
(メンブレンに溶出液が行きわたるように、中央に滴下するようご注意ください。また、溶出液量は20µLより減らさないでください。）
本キットでmiRNAの抽出は可能？: 本キットで抽出したTotal RNA溶液から、83 baseおよび107 baseのmiRNAをリアルタイムPCRで検出した実績がございます。
C Extraction Buffer(細胞用)添加後の遠心で沈殿ができない。: 細胞数や細胞種によっては沈殿が見えない場合がございます。
その場合は上清を全量回収し次のステップに進んでください。
接着細胞からRNA抽出を行う際のポイントはありますか？: 接着細胞などのはがれにくい細胞を取り扱う場合は、「C Extraction Buffer」で細胞を溶解する際にセルスクレーパーを使用した以下の操作をお試し下さい。

1）　細胞をPBS等で軽く洗浄
2）　容器全体にC Extraction Buffer（細胞用）をふりかけるようにピペッティング
3）　セルスクレーパーで細胞をはがし集める
4）　細胞を含むC Extraction Buffer（細胞用）をよくピペッティング（細胞が溶けてドロドロになるまで）
5）　溶液をチューブへ移す
6）　以降は＜動物培養細胞用抽出プロトコール＞の②より、マニュアルに従って操作する
心臓、骨格筋組織、軟骨から効率よくRNAを回収したい。: 心臓、骨格筋組織、軟骨は硬く繊維等も多いため、通常プロトコールではRNA抽出が困難です。Proteinase Kを用いる改変プロトコールで効率よくRNAを抽出することができます。
ISOSPIN Cell＆Tissue RNA を用いたマウス心臓からのRNA抽出（改変プロトコール）