LAMP法用核酸増幅試薬 LAMP MASTER シリーズ

LAMP MASTER for Turbidity, for Fluorescence, for Turbidity (Visible Dye)

品名	Code No.	包装単位	価格	備考
LAMP MASTER for Turbidity	311-08961	300反応用	45,000円	濁度検出用（本品）
LAMP MASTER for Fluorescence	317-08941	1 Set	55,000円	蛍光検出用（セット品）
LAMP MASTER for Turbidity (Visible Dye)	314-08951	1 Set	51,000円	目視判別用（セット品）

製造元（株）ニッポンジーン

表示価格は希望納入価格 (税別) です。

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製品説明

「LAMP MASTER for Turbidity」（2 x LAMP MASTER）は、LAMP法による等温核酸増幅のためのマスターミックス試薬です。

LAMP MASTER シリーズ

LAMP 法に必要な耐熱性鎖置換型DNAポリメラーゼ（Bst DNA Polymerase）、Mg²⁺、dNTPs、至適化されたバッファーなどを含むため、2 x LAMP MASTERにプライマーと鋳型核酸を添加するだけでLAMP法によるDNA増幅を行うことができます。

検出方法に合わせて試薬を選択

濁度検出2 x LAMP MASTERのみを用いる場合、反応液の濁度を測定し増幅を検出できます。

蛍光検出セット品付属のインターカレーターを添加することにより、リアルタイムPCR装置で検出できます。
（実験例はこちら）

目視判別セット品付属の蛍光目視試薬を添加することにより、増幅を目視で確認することできます。

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製品内容

本品

濁度検出用「LAMP MASTER for Turbidity」(300反応用)
構成品	容量	保存	備考
2 x LAMP MASTER	625 μl x 6本	-20°C	本品のラベルに使用期限が表示されております。（マニュアル添付）

セット品

蛍光検出用「LAMP MASTER for Fluorescence」(1 Set)
構成品	容量	保存	備考
本品（2 x LAMP MASTER）	625 μl x 6本	-20°C
10 x Intercalation Mix	750 μl x 1本	-20°C遮光	励起波長：450-500 nm、最大487 nm 蛍光波長：480-560 nm、最大503 nm

目視判別用「LAMP MASTER for Turbidity (Visible Dye)」(1 Set)
構成品	容量	保存	備考
本品（2 x LAMP MASTER）	625 μl x 6本	-20°C
25 x Visible Dye	300 μl x 1本	-20°C遮光

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使用例

LAMP MASTER for Fluorescence と AMV Reverse Transcriptase による RT-LAMP (One Step)

HeLa細胞からISOSPIN Cell & Tissue RNA (314-08211) を用いてtotal RNAを抽出し、鋳型RNAとして使用した。2 x LAMP MASTER、10 x Intercalation Mix、プライマーセット (標的領域：GAPDH) に逆転写酵素である AMV Reverse Transcriptase (311-07501) を追加して混合した反応液を調製し、リアルタイムPCR装置で増幅から検出までの工程をワンステップで行った。

反応条件

2 x LAMP MASTER	12.5 μl
10 x Intercalation Mix	2.5 μl
10 x LAMP Primer Mix	2.5 μl
AMV Reverse Transcriptase	0.2 units (1 μl) ※
鋳型RNA	0.5, 5, 50 ng (1 μl)
ddWater	up to 25 μl
68℃　60 min　→　融解曲線解析	装置:LightCycler^® 96

※　当社製品AMV Reverse Transcriptase (20 units/μl) を 0.2 units/μl になるよう希釈してから反応系に添加しました。

LAMP MASTER

結果　鋳型RNAを0.5 ng添加した場合も、15分以内に増幅を確認できた。

LAMP MASTER for Turbidity (Visible Dye) による目視判定例

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Q & A

RNAを鋳型にしたDNA増幅（RT-LAMP法）は可能ですか？: 反応系にAMV Reverse Transcriptaseを添加していただくことで可能になります。
実験例はこちら
濁度検出に使用できる装置は？: エンドポイント濁度測定装置 LT-16 (製品コード: NE4011) などが使用可能です。
蛍光検出に使用できる装置は？: リアルタイムPCR装置などが使用可能です。
目視判定に使用できるUV 照射装置は？: 240-260 nm あるいは 350-370 nm の範囲の波長を出力するUV 照射装置が使用できます。
10 x Intercalation Mixを添加したあと、DNA増幅を濁度測定装置で検出できますか？: 10 x Intercalation Mixは、インターカレーターと耐熱性ピロホスファターゼを含むため、ピロリン酸の生成による不溶物質（白濁）の形成は起こりません。濁度測定装置では検出できませんので、リアルタイムPCR装置などの蛍光検出用装置をご利用ください。
25 x Visible Dyeを添加したあと、DNA増幅を濁度測定装置で検出できますか？: 可能ですが、濁度測定の場合と目視判定の場合とで推奨のLAMP反応時間が異なります。反応時間を長くすることも可能ですが、その場合、陰性コントロールで非特異反応がないことを確認してください。