GeneAce SYBR™ One Step RT-qPCR Mix

1 Step RT-qPCR用試薬（SYBR™ Green検出系）

品名	Code No.	包装単位	価格	備考
GeneAce SYBR™ One Step RT-qPCR Mix	315-09743	500反応用	71,000円	500反応用 (20 μl反応系)
GeneAce SYBR™ One Step RT-qPCR Mix	319-09741	125反応用	32,000円	125反応用 (20 μl反応系)

製造元　（株）ニッポンジーン

表示価格は希望納入価格 (税別) です。

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製品説明

発売記念キャンペーンパンフレット（PDF）

GeneAce SYBR™ One Step RT-qPCR Mix は、インターカレーター法用の1ステップリアルタイムRT-qPCR 用試薬です。（プローブ検出系の場合はこちら）
本製品は、Hot Start Taq DNA Polymerase、改変型M-MLV Reverse Transcriptase、最適化されたバッファーとの組み合わせにより、高い増幅効率と特異性を実現しています。
本製品は、パッシブリファレンス色素が予め添加されているため、各種リアルタイムPCR 装置で使用することが可能です。

特長

・　圧倒的コストパフォーマンス（142円/20 µl反応系） ・　高い特異性と増幅効率 ・　SDS耐性の向上 ・　簡易RNA抽出試薬と組み合わせ可能 ・　各種リアルタイムPCR装置に対応（リファレンス色素添加済み）

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製品内容

使用回数

包装単位は20 µl反応系での使用回数です。

保存方法

－20°C（遮光）

・GeneAce SYBR™ One Step RT-qPCR Mix
構成品	500反応用	125反応用	形状
2 x GeneAce SYBR™ One Step Mix	1.25 ml x 4	1.25 ml x 1	Hot-Start Taq DNA Polymerase, dNTP, Mg²⁺, SYBR™ Green I, Passive Reference Dye, Stabilizers
40 x RT Mix (for SYBR™)	63 µl x 4	63 µl x 1	改変型M-MLV Reverse Transcriptase, RNase Inhibitor

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使用例

反応液組成（例）
2X GeneAce SYBR™ One Step Mix	10 μl	(final conc. 1X)
40X RT Mix (for SYBR™)	0.5 μl	(final conc. 1X)
25 μM Forward Primer	0.4 μl
25 μM Reverse Primer	0.4 μl
Template DNA	2 μl
ddWater	up to 20 μl

推奨PCR サイクル条件
50°C	10分	1サイクル	逆転写ステップ
95°C	2分	1サイクル	初期変性ステップ
95°C	10秒	45サイクル
60°C	45秒 (or 60秒)	45サイクル

融解曲線解析

プライマーの設計や鋳型 RNA 等により反応の至適条件が変わることがあります。
Thermo Fisher Scientific 社製のリアルタイム PCR 装置を使用する際の Run mode は、「Standard」、「Fast」のどちらでも使用できます。目的に応じて、Run mode をご選択ください。その際、初期設定から「推奨 PCR サイクル条件」に設定を変更してください。必ず逆転写ステップと初期変性ステップが含まれていることを確認してください。
増幅鎖長が 200 bp 以上の場合は、サイクル内の伸長時間を 45 sec. から 60 sec. に変更することを推奨します。なお、プライマー設計の際は、増幅鎖長が 300 bp を超えないようにしてください。増幅鎖長を 80-150 bp 程度にすることが最も望ましいです。

実験例1　増幅効率の比較

マウスから抽出したTotal RNA（1 ng, 100 pg, 10 pg）をテンプレートとし、各社1 step RT-qPCR試薬の推奨プロトコールに従って実施し、Ct値を比較した。（PCR volume：20 μl、装置：ABI QuantStudio™ 5）

結果　　各遺伝子の各鋳型量において、本品は最も低いCt値を示し、高い増幅効率が確認された。また、各鋳型量において高い直線性が得られたことから、鋳型濃度が低い条件でも安定した増幅が可能であることが確認された。

実験例2　ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)耐性の比較

マウスから抽出したTotal RNA（100 pg）をテンプレートとし、ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)の最終濃度が下記濃度となるように添加し、1 step RT-qPCRを行いCt値より増幅効率を比較した。PCRサイクル条件は、各社の推奨プロトコールに従って実施した。

結果　　本品は各SDS濃度において、高いSDS耐性を示した。

実験例3　簡易RNA抽出試薬との組み合わせの検証

Jurkat細胞（10⁵, 10⁴, 10³, 10², 10¹ cells /extraction）から、簡易RNA抽出試薬「Template Prepper for Cell RNA（Code No. 318-09451）」を用いてRNAを抽出した。そのうち2 µLを鋳型として、各種遺伝子を検出する1 step RT-qPCRを実施した。